Regulation of anesthetic efficacy through GABA-A R phosphorilation

通过 GABA-A R 磷酸化调节麻醉效果

• 批准号: 21K08941
• 负责人: 上野 伸哉
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Hirosaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08941/
• 关键词: GABA-A受容体; 受容体トラフィッキング; 受容体リン酸化調節; 麻酔薬; 受容体リン酸化

前年度に確立したNeuro2Aの安定発現細胞株を用いて、パッチクランプ条件下にてGABAによる電流応答および麻酔薬の修飾効果を解析した。安定発現細胞株はbeta３サブユニットのS408/9部分をアラニン置換したS408/9A mutantとグルタミン酸に置換したS408/9E mutantの2種類を作成した。前者は脱リン酸化、後者はリン酸化に相当する変異導入となる。これらbeta3サブユニットと、alpha１とgamma2サブユニットを共発現させ解析した。　すべて野生型であるalpha1, beta3およびgamma2サブユニットを共発現させた細胞株の反応をコントロールとして比較検討した。beta３（S408/9A ）mutant サブユニットを含むGABA-A受容体はGABA投与に反応し、抗不安薬diazepamや麻酔薬propofol存在下でGABA応答は増強した。対照的にbeta３（S408/9E）mutantサブユニットを含むGABA-A受容体は応答が減弱した。免疫組織学解析によりbeta３（S408/9A ）mutant サブユニットを含むGABA-A受容体はコントロールと同様形質膜に分布しているが、beta３（S408/9E）mutantサブユニットを含むGABA-A受容体は形質膜へ分布していないことが明らかとなり、電気生理学的結果を支持するものであった。これらのことよりbeta3サブユニットのS408/9部位リン酸化が受容体トラフィッキングを制御していることが示唆された。さらにトラッフィキング関連のタンパク質探索のため、HEK293細胞にbeta３の野生型S408/9、S408/9A mutantおよびS408/9E mutantをそれぞれ発現させ、HA-tagを利用し免疫沈降をおこなった。コントロールには見られない特異的バンドを切り出して質量分析を行い、相互作用するタンパク質を同定した。

A stable Neuro2A cell line was established in the previous year to analyze the effects of GABA on current and drug modification under conditions of high temperature and high temperature. The stable developing cell line was transformed into S408/9A mutant and S408/9E mutant. The former is deacidified and the latter is acidified.これらbeta3サブユニットと、alpha1とgamma2サブユニットを共発现させ解析した。The wild-type alpha1, beta 3 and gamma2 cells were isolated and compared. beta3 (S408/9A) mutant GABA-A receptor GABA response is enhanced in the presence of diazepam and propofol. Beta3 (S408/9E) mutant contains GABA-A receptor and is weakened. Immunohistochemical analysis of beta3 (S408/9A) mutant cells supported by electrophysiological results showed that the GABA-A receptor was distributed in the plasma membrane. The S408/9 part of the cell is acidified and the cell is controlled. In addition, HEK293 cells were used to detect the wild-type S408/9 and S408/9A mutants of beta3 and S408/9E mutants. The quality of the product is determined by the quality analysis and interaction.

项目成果

The effect of GABAA receptor β3 subunit phosphorylation on intracellular distribution

GABAA受体β3亚基磷酸化对细胞内分布的影响

• 发表时间: 2021
• 作者: Shuji Shimoyama;Moeka Fujii;Tomonori Furukawa and Shinya Ueno
• 通讯作者: Tomonori Furukawa and Shinya Ueno

ジアゼパム長期使用による海馬神経機能への影響

长期服用地西泮对海马神经功能的影响

• 发表时间: 2021
• 作者: 増山望;古川智範;二階堂義和;下山修司;能登谷綾香;上野伸哉
• 通讯作者: 上野伸哉

beta3 サブユニットのリン酸化がGABAA受容体の機能および輸送へ及ぼす影響

β3 亚基磷酸化对 GABAA 受体功能和转运的影响

• 发表时间: 2023
• 作者: 杉浦健之;藤掛数馬;太田晴子;小林仰 藤井萌加 下山修二 古川智範 上野信也
• 通讯作者: 小林仰 藤井萌加 下山修二 古川智範 上野信也

GABAA受容体の細胞内分布におけるβ3サブユニットのリン酸化の影響

β3亚基磷酸化对GABAA受体亚细胞分布的影响

• 发表时间: 2021
• 作者: 藤井萌加;下山修司;古川智範;上野伸哉
• 通讯作者: 上野伸哉

Lipopolysaccharide induces mouse translocator protein (18 kDa) expression via the AP-1 complex in the microglial cell line, BV-2

脂多糖通过小胶质细胞系 BV-2 中的 AP-1 复合物诱导小鼠易位蛋白 (18 kDa) 表达

• DOI: 10.1371/journal.pone.0222861
• 发表时间: 2019
• 期刊: PLOS ONE
• 影响因子: 3.7
• 作者: Shimoyama Shuji;Furukawa Tomonori;Ogata Yoshiki;Nikaido Yoshikazu;Koga Kohei;Sakamoto Yui;Ueno Shinya;Nakamura Kazuhiko
• 通讯作者: Nakamura Kazuhiko