液体窒素処理による切断肢の長期凍結保存と再接着に関する実験研究

液氮治疗断肢长期冷冻保存与再接的实验研究

• 批准号: 21K09234
• 负责人: 岡田 博
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09234/
• 关键词: 切断肢; 液体窒素; Cryopreservation技術; 凍結法; 解凍法; 長期凍結保存; 再接着

四肢切断に対する再接着術は、常温では6時間以内、低温(2~4°C)保存下では24時間以内が限界とされてきたが、近年になって切断指を液体窒素処理で保存する ことで5日~81日後に再接着術が可能であった臨床例が中国から報告されている。しかしながら、四肢を構成する様々な器官や組織の長期保存に伴う変化や再接着 後の安全性や活動能力についての基礎的研究結果は乏しく、臨床応用の拡大は懸念される。本研究では、ラットを用いてCryopreservation技術で凍結保存した切 断肢の再接着実験を行い、切断肢の新たな保存限界時間、安全かつ有効な長期保存方法 、再接着後の運動器官の変化や能力を調査し、切断肢の長期保存技術を 確立することを目的とする。実験動物としてはFischer 344ラットを用いた。15週齢のラット片側後枝を下腿中央で切断して凍結方法及び解凍方法についての研究を本年度に行なった。切断 肢は凍結後、14日以上経過してから解凍を行なった。凍結法として切断肢をガーゼでくるみ、それを滅菌ゴム手袋の中に密閉した後に液体窒素につけて急速凍結 を行う方法、解凍方法として45°Cの0.9%の生理食塩水に15分間つけ、その後50mlのマンニトール、25,000Uヘパリン、デキサメサゾン4mgを含んだ16°Cの溶解液 につける緩徐解凍法を行った。同方法での解凍肢の状態は特に切断直後の下腿と肉眼的には遜色なく、血管縫合も可能であることが判明したが、長期間の生着が可能かどうか、また緩徐凍結法でも血管縫合が可能か実験中である。

40例断流手术病人再接手术，常温6 ℃以上，低温（24 ℃）保存在24 ℃以上的限定范围内的无菌检查标准，近年断流手术病人指的是液体营养素营养不良者，保存在5日~81日的无菌检查再接手术可能的无菌检查标准。しかしながら、四肢を構成する様々な器官や組織の長期保存に伴う変化や再接着 後の安全性や活動能力についての基礎的研究結果は乏しく、臨床応用の拡大は懸念される。本研究采用冷冻、冷冻保存技术，将冷冻保存的组织切片，再接上阻碍进行冷冻、切断新的冷冻保存限制区、安全有效的冷冻期保存方法，再接上冷冻保存器官的生物化能力增强，切断冷冻期保存技术建立了冷冻保存目的的新途径。担保物抵押费氏344年担保使用费氏。15週齢のラット片側後枝を下腿中央で切断して凍結方法及び解凍方法についての研究を本年度に行なった。切断 肢は凍結後、14日以上経過してから解凍を行なった。溶菌法制备的口服液中含有0.9%生理盐水，50ml生理盐水，25，000U生理盐水，4mg含氟16°C溶菌液，100 ml生理盐水。同方法での解凍肢の状態は特に切断直後の下腿と肉眼的には遜色なく、血管縫合も可能であることが判明したが、長期間の生着が可能かどうか、また緩徐凍結法でも血管縫合が可能か実験中である。