Elucidation of the mechanism of laryngeal papilloma formation

今年度は、扁平上皮細胞株HaCatおよびマウスマクロファージ細胞株RAW264の細胞にHPVのE4、E5a、E5bの遺伝子を導入した。現在、機能解析を行っている。さらに浜松医科大学との共同研究で、喉頭乳頭腫検体においてE4が発現する細胞をナノスーツ-CLEM法を用いて走査型電子顕微鏡で観察を行った。その結果、E4が発現する細胞内にHPVの子ウイルスの粒子で満たされていた。このことからE4がウイルスの形成およびウイルスの放出に関係することが示唆された。また、今年度は鼻副鼻腔にできる内反性乳頭腫（IP）の形成にHPVが関与するかも調べた。IP20例、IPから扁平上皮癌に進行したIP+SCC 7例、副鼻腔扁平上皮癌（SNSCC）20例においてHPVの感染の有無、そしてEGFR遺伝子の変異をPCR法により調べた。その結果、HPVはIP、IP+SCC、SNSCCにおいてそれぞれ25%、57.1%、35％で検出された。さらに、HPV関連癌のサロゲートマーカーとなるp16の過剰発現はIP+SCCの28.5％、SNSCCの25%で見られた。一方、EGFR遺伝子のExon20のFrame insertionはIPにおいて45%、IP+SCCでは28.5％、SNSCCでは0％であった。さらにFrame insertionの見られたIPおよびIP+SCCの組織において、EGFRのチロシンキナーゼリン酸化サイトが特異的にリン酸化されていた。このことから、IPおよびIP+SCCの病因としてEGFR遺伝子のExon20の変異が最も関与しており、また一部にHPVが関与することが示唆された。

今年度は、扁平上皮細胞株HaCatおよびマウスマクロファージ細胞株RAW264の細胞にHPVのE4、E5a、E5bの遺伝子を導入した。現在、機能解析を行っている。さらに浜松医科大学との共同研究で、喉頭乳頭腫検体においてE4が発現する細胞をナノスーツ-CLEM法を用いて走査型電子顕微鏡で観察を行った。その結果、E4が発現する細胞内にHPVの子ウイルスの粒子で満たされていた。このことからE4がウイルスの形成およびウイルスの放出に関係することが示唆された。また、今年度は鼻副鼻腔にできる内反性乳頭腫（IP）の形成にHPVが関与するかも調べた。IP20例、IPから扁平上皮癌に進行したIP+SCC 7例、副鼻腔扁平上皮癌（SNSCC）20例においてHPVの感染の有無、そしてEGFR遺伝子の変異をPCR法により調べた。その結果、HPVはIP、IP+SCC、SNSCCにおいてそれぞれ25%、57.1%、35％で検出された。さらに、HPV関連癌のサロゲートマーカーとなるp16の過剰発現はIP+SCCの28.5％、SNSCCの25%で見られた。一方、EGFR遺伝子のExon20のFrame insertionはIPにおいて45%、IP+SCCでは28.5％、SNSCCでは0％であった。さらにFrame insertionの見られたIPおよびIP+SCCの組織において、EGFRのチロシンキナーゼリン酸化サイトが特異的にリン酸化されていた。このことから、IPおよびIP+SCCの病因としてEGFR遺伝子のExon20の変異が最も関与しており、また一部にHPVが関与することが示唆された。