垂直方向からの再生誘導は骨再生を促進させるか？‐幹細胞シートと骨膜の応用‐

本研究は，骨膜および人工骨膜（脱分化脂肪細胞（DFAT)シート）を動物モデルの円筒天井部に設置し垂直方向から再生誘導させることによる，円筒内での垂直方向の骨再生について検討する。はじめに，骨膜による垂直方向の骨再生に対する再生誘導能誘導能を検討する。具体的には，ラット頭頂部に直径5.0 ㎜，高さ4.0 ㎜の円筒を設置し，垂直方向の骨再生を検討するための動物モデルを作製する。そして，垂直方向からの骨膜の再生誘導能を検討するために，円筒天井部にチタンメッシュならびにポリテトラフルオエチレン製およびコラーゲン製などの組織遮断膜を用いて円筒天井を被覆する。 さらに，円筒内に成長因子（VEGF，b-FGF，HGF，PDGFおよびAndiopoetine-1）や骨補填材などの足場を添加し，それらの組み合わせ効果について検討する。円筒内の骨再生の動態はマイクロCTを用いて術後1～12週間，経日的に観察する。また，同様の動物モデルを用いて総頸動脈から造影剤を注入し，円筒内の新生血管の動態をマイクロCTで同様の期間，観察する。これらの実験で再生された，再生骨組織を試料として，再生骨中に発現するRANKLなどの遺伝子を免疫組織学的に観察する。RT-PCR法によって再生組織内の遺伝子発現を解析し，垂直方向での骨再生のメカニズムを解明する。次に，人工骨膜を用いて垂直方向から再生誘導させ骨再生を検討する。人工骨膜（DFFATシート）の作製は，ラット腹部脂肪組織からコラゲナーゼ処理後，低遠心分離を行い，浮遊した成熟脂肪細胞分画の天井培養を1週間行い，DFAT細胞を播種し，DFATシートを作製する。そして，自家伸展骨膜の実験方法と同様に，動物モデルの円筒天井部にDFATシートを設置し，成長因子や骨補填材などの添加を行い，同様に再生骨の動態観察や再生骨組織中の遺伝子発現について解析する。

本研究は，骨膜および人工骨膜（脱分化脂肪細胞（DFAT)シート）を動物モデルの円筒天井部に設置し垂直方向から再生誘導させることによる，円筒内での垂直方向の骨再生について検討する。はじめに，骨膜による垂直方向の骨再生に対する再生誘導能誘導能を検討する。具体的には，ラット頭頂部に直径5.0 ㎜，高さ4.0 ㎜の円筒を設置し，垂直方向の骨再生を検討するための動物モデルを作製する。そして，垂直方向からの骨膜の再生誘導能を検討するために，円筒天井部にチタンメッシュならびにポリテトラフルオエチレン製およびコラーゲン製などの組織遮断膜を用いて円筒天井を被覆する。 さらに，円筒内に成長因子（VEGF，b-FGF，HGF，PDGFおよびAndiopoetine-1）や骨補填材などの足場を添加し，それらの組み合わせ効果について検討する。円筒内の骨再生の動態はマイクロCTを用いて術後1～12週間，経日的に観察する。また，同様の動物モデルを用いて総頸動脈から造影剤を注入し，円筒内の新生血管の動態をマイクロCTで同様の期間，観察する。これらの実験で再生された，再生骨組織を試料として，再生骨中に発現するRANKLなどの遺伝子を免疫組織学的に観察する。RT-PCR法によって再生組織内の遺伝子発現を解析し，垂直方向での骨再生のメカニズムを解明する。次に，人工骨膜を用いて垂直方向から再生誘導させ骨再生を検討する。人工骨膜（DFFATシート）の作製は，ラット腹部脂肪組織からコラゲナーゼ処理後，低遠心分離を行い，浮遊した成熟脂肪細胞分画の天井培養を1週間行い，DFAT細胞を播種し，DFATシートを作製する。そして，自家伸展骨膜の実験方法と同様に，動物モデルの円筒天井部にDFATシートを設置し，成長因子や骨補填材などの添加を行い，同様に再生骨の動態観察や再生骨組織中の遺伝子発現について解析する。