Characterization of neuron-like cells differentiated from human dental pulp stem cells

人牙髓干细胞分化的神经元样细胞的表征

基本信息

  • 批准号:
    21K10172
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.75万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    2021
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2021-04-01 至 2024-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

レット症候群女児および健常女児の歯髄由来の間葉系幹細胞(MSCs)について、市販の間葉系幹細胞専用培地を用いて培養したのち、Gene Query Human Cell Surface Markers qPCR Array Kit を用いて細胞表面抗原を検索した。そののち、健常女児の抜去歯より採取した歯髄組織について、3%グリオキサール溶液で固定後、凍結組織切片を作成した。CD69ならびにCD4、CD8、CD103のいずれかについて免疫蛍光二重染色を行い、共発現の有無を検討した。続いて低接着表面三次元培養プレートにて、健常女児歯髄由来MSCsを培養し、細胞の活性ならびに増殖能を調べた。Cell Surface Markers qPCR Array Kitにより、細胞表面抗原88種について、レット症候群女児由来のMSCsにおいて発現レベルの高い抗原を検索した。その結果、これまで歯髄由来MSCsで発現の報告のないCD69について、レット症候群女児由来MSCsのみに高い発現を確認した。そこでその制御機序を明らかにする目的でTNF-αによる刺激を行い、CD69の発現をリアルタイムPCR法で調べた。その結果、レット症候群女児および健常女児の歯髄由来MSCsでは、ともにTNF-α刺激によりCD69 mRNAが濃度依存的に増加することを確認した。また健常女児歯髄由来MSCsについての免疫蛍光二重染色で、CD69とCD4、CD8、CD103のいずれかが共発現している細胞の存在を確認したが、その数はわずかであった。続いて、歯髄由来MSCsを最長で7日間静置培養し、神経細胞への分化誘導の前段階としてスフェロイド形成を試みた。しかし培養開始後2日から3日で100から1000個程度の細胞塊の形成を認めたものの、その後増殖は停止し、7日後に細胞塊内部の細胞がアポトーシスを起こしていることを確認した。
The origin of the disease is that the cells of the normal girls of the syndrome are MSCs, the cells of the city are cultured, and the cell surface antigens are used by Gene Query Human Cell Surface Markers qPCR Array Kit. After being fixed in solution, the tissue slices were cut and made into tissue slices. CD69 antibody CD4, CD8, CD103 antibody were detected by immuno-double staining. The three-dimensional culture is followed by the three-dimensional culture of the surface, the origin of the MSCs, the activity of the cells, the ability to reproduce. There are 88 kinds of Cell Surface Markers qPCR Array Kit antigen, cell surface antigen, and the cause of the female patients with MSCs syndrome. The results of this study, the cause of the disease, the cause of the MSCs report, the cause of the CD69 syndrome, the cause of the syndrome, the cause of the disease, the cause of the syndrome, the cause of the disease, the cause of the disease, the cause of the syndrome, the cause of the disease, the cause of the syndrome, the cause of the disease, the cause of the syndrome, the cause of the disease, the cause of the disease, the cause of the disease, In order to control the sequence of the control machine, it is clear that the purpose of TNF- α is to stimulate the operation, and the CD69 is to show that it is necessary to improve the performance of the PCR method. The results showed that the causes of MSCs and TNF- α stimulation in healthy girls with syndrome were significantly higher than those in normal girls, which were closely related to the degree of CD69 mRNA dependence. The cause of MSCs infection is the double staining of CD69, CD8, and CD103 cells. There are positive cells and positive cells. The reason why the MSCs has been incubated for a maximum of 7 days, and the differentiation of the cells has led to the formation of an experiment in the front section. On the 2nd or 3rd day after the start of the training, 1000 cells were formed, the colonization stopped after the culture began, and the cell cycle was confirmed 7 days after the start of the training.

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
MECP2遺伝子変異を有するヒト歯髄幹細胞の特性解析
MECP2基因突变的人牙髓干细胞的表征
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    星まなみ;石山未紗;菊入 崇;長谷賢知;相馬久実;白川哲夫
  • 通讯作者:
    白川哲夫
Alteration of monoaminergic systems in the caudal medulla and its possible link to diurnal increase of apnea in a mouse model of Rett syndrome
  • DOI:
    10.2334/josnusd.22-0474
  • 发表时间:
    2023-04-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    1.9
  • 作者:
    Hoshi, Manami;Ishiyama, Misa;Shirakawa, Tetsuo
  • 通讯作者:
    Shirakawa, Tetsuo
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  • 影响因子:
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  • 通讯作者:
    吉岡 充弘
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    柿木 保明;野本 たかと;梶 美奈子;一戸 達也;白川 哲夫;關田 俊介;筒井 睦;弘中 祥司;八若 保孝
  • 通讯作者:
    八若 保孝

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    $ 2.75万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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知道了