歯周組織での一酸化窒素(NO)産生と細胞傷害

牙周组织中一氧化氮 (NO) 的产生和细胞损伤

• 批准号: 06857160
• 负责人: 白川 哲夫
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06857160/
• 关键词: 一酸化窒素; Nitric Oxide; 歯根膜; Nitric Oxide Synthase; 細胞培養

1.結果 ヒト菌根膜細胞の一酸化窒素(NO)産生能を調べるため、細胞培養系を用いて実験を行った。矯正治療を目的として抜去された永久歯から歯根膜組織を分離し、トリプシン処理したのち血清添加MEMを用いて細胞の培養を行った。培養開始から1カ月後に同様の条件で約10^4個/培養皿として7日間の培養を行い、培養液中に含まれるNO_2の量をグリース反応法により測定した。NO_2濃度は培養開示後12時間より上昇し、72-120時間後にほぼプラトーに達した。培養皿当たりのNO_2濃度の増加量は最高で8.5μM/24時間であった。NO_2の増加が一酸化窒素合成酵素(NOS)によるものかどうかを明らかにするため、NOSの競合的阻害剤であるL-N^G-Nitroarginine Methyl EsterHCI(L-NAME)1mMを培養液に加え、NO_2濃度を測定した。その結果、培養120時間までのNO_2産生量はL-NAMEにより約70%抑制された。今回の実験では3人の患者の抜去歯から分離した細胞を用いたが、同じ歯根膜組織から分離した培養細胞では培養皿間のNO_2濃度のばらつきは小さかったのに対し、異なる個体から得た培養細胞によるNO_2産生量を比較すると、最高で10倍近い差が認められた。2.考察と展望 本研究の結果からヒト歯根膜由来の細胞にNO産生能があること、およびこのNOは歯根膜由来の細胞に発現したNOSにより産生された可能性が高いことが示唆された。この結果を裏付けるためには組織学的手法によるNOSの同定が必要であろう。また、歯根膜細胞に発現するNOSには内皮型(cNOS)とマクロファージ型(iNOS)の2つのタイプが考えられるが、今回はいずれのNOSによるものかを明らかにするには至らなかった。今後、無血清培地での細胞培養を確立し、iNOSの誘導因子を含まない(あるいは投与した)条件下でNO産生能を調べる予定である。

1. Results NO production in mycorrhizal membrane cells could be regulated and cell culture system could be used. The aim of corrective treatment is to isolate the root membrane tissue of the tooth and to add MEM to it. The amount of NO_2 in the culture medium was measured by reverse osmosis method after 1 month of culture. NO_2 concentration increased 12 hours after incubation and reached 72-120 hours after incubation. When NO_2 concentration increased in culture dish, the highest was 8.5μM/24 hours. NO_2 concentration was measured by adding 1mM L-N^G-Nitroarginine Methyl EsterHCI(L-NAME) to culture medium. The NO_2 production was inhibited by 70% after incubation for 120 days. In the present study, the NO2 concentrations in cultured cells from three patients were significantly higher than those from the same root membrane tissue. 2. Looking forward to the results of this study, the possibility of NO production in root membrane derived cells is high. The result is that the method of histology is necessary. The expression of NOS in dental root membrane cells is endothelial type (cNOS), iNOS type (iNOS) and iNOS type (iNOS). In the future, NO production can be regulated under the condition of serum-free culture and iNOS induction factor.