内因性アンチセンスRNAによる転写因子活性制御と歯胚分化抑制のメカニズム

内源反义RNA调控转录因子活性及抑制牙胚分化的机制

基本信息

  • 批准号:
    16659568
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.05万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    2004
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2004 至 2005
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

内因性Msx1アンチセンスRNAとMsx1遺伝子の相互作用が先天性歯胚欠如に関与している可能性を検証するため、歯胚形成過程でのMsx1およびPax9の内因性アンチセンスRNAの発現と、各々のセンスRNAとアンチセンスRNAの相互作用を動物実験系を用いて検討した。1)マウス胎仔歯胚発生領域でのMsx1およびPax9の内因性アンチセンスRNAの検出麻酔下にて妊娠マウスから胎生9,12,15,18日目の胎仔を分離し、歯胚発生領域を含め、頭部よりtotal RNAを抽出した。得られたサンプルについて、RT-PCRによりMsx1およびPax9のセンスRNAおよびアンチセンスRNAの検出を試みた。Msx1のセンスRNAおよびアンチセンスRNAについては胎生期のいずれのステージにおいてもPCR産物が検出された。一方、Pax9のセンスRNAおよびアンチセンスRNAの検出に関しては、センスRNAのPCR産物のみ検出が可能であった。このことから、Pax9のアンチセンスRNAについては、マウスの胎生期において発現していないかあるいは発現量がきわめて少ないものと考えられた。Msx1のセンスRNAおよびアンチセンスRNAについてのin situ hybridization法による検出については、胎仔マウスの急速凍結切片を作製し、digoxigeninでラベルした非放射性プローブでのシグナル検出を試みたところ、センスRNAは胎生9日から、アンチセンスRNAでは胎生12日から上下顎骨領域に発現が認められた。Msx1のセンスRNAおよびアンチセンスRNA、ならびにPax9のセンスRNAが、歯胚形成期にどのような相互作用を発揮しているかについてはMSX1およびPAX9の定量を含め今後の検討が必要である。2)神経幹細胞の胎仔顎骨部への移植と移植後の分化についての検討胎生15日目のGFPトランスジェニックマウス胎仔の線条体より神経幹細胞を採取し、胎生18日目のマウスより分離した顎骨体部に移植し培養を行った。4%paraformaldehydeにて固定したのち、薄切切片を作製してレーザー共焦点顕微鏡による蛍光観察を行ったところ、グリア細胞様の形態を示す細胞への分化を確認した。歯胚組織へのGFP陽性細胞の侵入は認められなかった。
Endogenous Msx1 ア ン チ セ ン ス RNA と Msx1 posthumous son 伝 の が congenital 歯 embryo owe such as interaction between に masato and し て い る possibility を 検 card す る た め, 歯 embryo formation で の Msx1 お よ び Pax9 interact の endogenous ア ン チ セ ン ス RNA の 発 と now, various 々 の セ ン ス RNA と ア ン チ セ ン の ス RNA interaction be を animals The laboratory used を て検 to seek た. 1) マ ウ ス tire tsai 歯 embryo 発 raw field で の Msx1 お よ び Pax9 interact の endogenous ア ン チ セ ン ス RNA の 検 under the hemp 酔 に て pregnancy マ ウ ス か ら viviparous,12,15,18 September orders の tire を separation し, 歯 embryo 発 field contains を め, head よ り を total RNA extraction し た. Have to ら れ た サ ン プ ル に つ い て, rt-pcr に よ り Msx1 お よ び Pax9 interact の セ ン ス RNA お よ び ア ン チ セ ン ス RNA の 検 try out を み た. Msx1 の セ ン ス RNA お よ び ア ン チ セ ン ス RNA に つ い て は TaiShengQi の い ず れ の ス テ ー ジ に お い て が も PCR products 検 out さ れ た. Side and Pax9 interact の セ ン ス RNA お よ び ア ン チ セ ン ス RNA の 検 out に masato し て は, セ ン の の ス RNA PCR products み 検 out が may で あ っ た. こ の こ と か ら, Pax9 interact の ア ン チ セ ン ス RNA に つ い て は, マ ウ ス の TaiShengQi に お い て 発 now し て い な い か あ る い は 発 now quantity が き わ め て less な い も の と exam え ら れ た. Msx1 is セ ス スRNAおよびア チセ チセ ス スRNAに て て て <s:1> in situ Hybridization method に よ る 検 out に つ い て は, tire seed マ ウ ス の し, the quick freezing slice を cropping digoxigenin で ラ ベ ル し た non-radioactive プ ロ ー ブ で の シ グ ナ ル 検 try out を み た と こ ろ, セ ン ス RNA は viviparous 9 か ら, ア ン チ セ ン ス RNA で は viviparous 12 か ら jaws on the collar The domain に shows が recognizing められた. Msx1 の セ ン ス RNA お よ び ア ン チ セ ン ス RNA, な ら び に Pax9 interact の セ ン ス RNA が, 歯 embryo formation に ど の よ う な interaction を 発 swing し て い る か に つ い て は Msx1 お よ び Pax9 interact の quantitative を containing め future の beg が 検 necessary で あ る. 2) god 経 の fetal stem cells seed jaw bone へ の graft と の differentiation after transplantation に つ い て の beg viviparous 検 15 orders の GFP ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス tire tsai の line body よ り を 経 stem cells take し god, viviparous 18 eyes の マ ウ ス よ り separation し た body に jaw bone transplant し culture line を っ た. 4% paraformaldehyde に て fixed し た の ち, long thin slices を cropping し て レ ー ザ ー total focus 顕 micromirror に よ る 蛍 light line 観 examine を っ た と こ ろ, グ リ ア cells others の form を す cells へ の differentiation を confirm し た. Youdaoplaceholder0 embryonic tissue へ <s:1> GFP-positive cells <s:1> invade recognize められな った った.

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Mastication influences the survival of newly generated cells in mouse dentate gyrus
  • DOI:
    10.1097/00001756-200502280-00009
  • 发表时间:
    2005-02
  • 期刊:
  • 影响因子:
    1.7
  • 作者:
    M. Mitome;T. Hasegawa;T. Shirakawa
  • 通讯作者:
    M. Mitome;T. Hasegawa;T. Shirakawa
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  • 通讯作者:
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    1998
  • 资助金额:
    $ 2.05万
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    2005
  • 资助金额:
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作者:{{ showInfoDetail.author }}

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