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内因性アンチセンスRNAによる転写因子活性制御と歯胚分化抑制のメカニズム

内源反义RNA调控转录因子活性及抑制牙胚分化的机制

基本信息

批准号：
16659568
负责人：
白川哲夫
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659568/
关键词：
Msx1 Pax9 内因性アンチセンスRNA 歯胚発生 in situ hybridization法神経幹細胞 GFP 胎仔マウス

项目摘要

内因性Msx1アンチセンスRNAとMsx1遺伝子の相互作用が先天性歯胚欠如に関与している可能性を検証するため、歯胚形成過程でのMsx1およびPax9の内因性アンチセンスRNAの発現と、各々のセンスRNAとアンチセンスRNAの相互作用を動物実験系を用いて検討した。1)マウス胎仔歯胚発生領域でのMsx1およびPax9の内因性アンチセンスRNAの検出麻酔下にて妊娠マウスから胎生9,12,15,18日目の胎仔を分離し、歯胚発生領域を含め、頭部よりtotal RNAを抽出した。得られたサンプルについて、RT-PCRによりMsx1およびPax9のセンスRNAおよびアンチセンスRNAの検出を試みた。Msx1のセンスRNAおよびアンチセンスRNAについては胎生期のいずれのステージにおいてもPCR産物が検出された。一方、Pax9のセンスRNAおよびアンチセンスRNAの検出に関しては、センスRNAのPCR産物のみ検出が可能であった。このことから、Pax9のアンチセンスRNAについては、マウスの胎生期において発現していないかあるいは発現量がきわめて少ないものと考えられた。Msx1のセンスRNAおよびアンチセンスRNAについてのin situ hybridization法による検出については、胎仔マウスの急速凍結切片を作製し、digoxigeninでラベルした非放射性プローブでのシグナル検出を試みたところ、センスRNAは胎生9日から、アンチセンスRNAでは胎生12日から上下顎骨領域に発現が認められた。Msx1のセンスRNAおよびアンチセンスRNA、ならびにPax9のセンスRNAが、歯胚形成期にどのような相互作用を発揮しているかについてはMSX1およびPAX9の定量を含め今後の検討が必要である。2)神経幹細胞の胎仔顎骨部への移植と移植後の分化についての検討胎生15日目のGFPトランスジェニックマウス胎仔の線条体より神経幹細胞を採取し、胎生18日目のマウスより分離した顎骨体部に移植し培養を行った。4%paraformaldehydeにて固定したのち、薄切切片を作製してレーザー共焦点顕微鏡による蛍光観察を行ったところ、グリア細胞様の形態を示す細胞への分化を確認した。歯胚組織へのGFP陽性細胞の侵入は認められなかった。

The interaction between intrinsic Msx1 gene and Msx1 gene is related to the development of congenital dentition. The interaction between intrinsic Msx1 gene and Pax9 gene during dentition is studied in animal models. 1) Endogenous RNA extraction from the embryonic development area of the fetus on days 9, 12, 15, and 18 of gestation. We got the results of RT-PCR, Msx1, Pax9 and RNA detection. Msx1's DNA sequence and DNA sequence were detected in the middle of the reproductive cycle and PCR products were detected. On the other hand, it is possible to detect the PCR products of Pax9 gene. This is the first time that a person has ever been born, and the first time he has ever been born, he has been born. Msx1 gene RNA is detected by situ hybridization, and the embryo is frozen rapidly. Digoxigenin gene is detected by non-radioactive RNA. The gene RNA is detected on the 9 th day after birth, and the gene RNA is detected on the 12 th day after birth. Msx1 RNA, PAX 9 RNA, PAX9 RNA, PAX 1 RNA, PAX 9 RNA, PAX9 RNA, PAX, PAX, PAX, 2)Transplantation and differentiation of neural stem cells from fetal jaw bone at day 15 of birth and culture of neural stem cells from fetal jaw bone at day 18 of birth. 4% paraformaldehyde fixation, thin section preparation, confocal microscopy, observation of cell morphology, identification of cell differentiation Invasion of GFP positive cells in embryonic tissue was recognized by the researchers.