象牙芽細胞突起の機能を有するヒト象牙質オルガノイド作成の試み

尝试创建具有成牙本质细胞过程功能的人类牙本质类器官

• 批准号: 21K10176
• 负责人: 岡 暁子
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Fukuoka Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K10176/
• 关键词: オルガノイド; 象牙質; 象牙芽細胞; 3Dプリンター; 細胞外マトリックス

象牙細管を有する生体象牙質に近い組織構造をもつ象牙質再生を目指して、間葉系および上皮系の2種の細胞を用いてスフェロイド形成を行い、バイオプリンターを用いて3次元構築を行った。使用する細胞は、前年度に引き続き、マウス頭蓋神経堤由来細胞株O9-1、マウスエナメル上皮細胞株mHAT9d細胞を用いた。バイオプリンターに適合するスフェロイド体形成の条件設定は終了していたため、バイオプリンターを用いて、それぞれのスフェロイド体による3次元構築を行った。これまでの試みから、3次元構造体を作成した場合、内層の細胞への培地の浸潤、酸素供給の低下から、構造体を維持できないことが明らかになってきており、プリントの設計、構築後の培養方法について、様々な方法を検討した。結果として、円柱状にスフェロイドを構築し、個々のスフェロイド体が連続した後に、3次元構造体内腔にカテーテルを挿入し、培地供給を行うことで、2－3週間培養が可能となるところまで、条件設定を行うことができた。まずは、それぞれの細胞のみで3次元構築を行った。カテーテル培養を7日間行い、構造体を組織学的に評価した。外層は細胞密度が高く内層にむかって細胞外成分の増加が観察された。Ki-67陽性細胞は O9-1、mHAT9dともに最外層に多く観察され、またその構造は線維性膜状として観察された。構造体全体を観察すると、細胞密度が疎である領域と密である領域が観察され、これはSpheroid体の配列に依存しているように考えられた。次に象牙質形成にむけて、石灰化誘導の方法を決定に着手した。まずはスフェロイド体の状態での石灰化条件を決定するため、培地にカルシウムおよびリンを添加することとし、現在、それぞれの最適添加濃度の決定を検討している。

Ivory tubule has two kinds of cells, i.e. dentin regeneration, mesenchymal system and epithelial system. The cell line O9 -1 and the cell line mHAT9d were used. The conditions for the formation of a three-dimensional structure are set in the following ways: This paper discusses the conditions for making three-dimensional structure, infiltration of inner layer cell culture, decrease of acid supply, maintenance of structure, design and culture method after construction. As a result, after the cylindrical shape of the spider is constructed and the individual spider bodies are connected, the cells are inserted into the inner cavity of the three-dimensional structure, and the supply of cultivation land is carried out. Therefore, cultivation is possible in 2-3 weeks. Therefore, the conditions can be set. The three dimensional structure of the cell was constructed in the middle of the cell. The culture was carried out in 7 days, and the histological evaluation of the structure was carried out. The outer layer has a high cell density and the inner layer has an increased extracellular component. Ki-67 positive cells were observed in the outermost layers of O9 -1 and mHAT9d, and their structures were linear and membranous. The whole structure is observed, the cell density is observed, and the arrangement of the Spheroid is observed. The method of formation and calcification induction of dentin was determined. To determine the lime conditions for the state of the mineral, the optimum concentration of lime added to the mineral is discussed.

项目成果

Conditional knockout of transient receptor potential melastatin 7 in the enamel epithelium: Effects on enamel formation.

有条件地敲除牙釉质上皮细胞中瞬时受体电位 melastatin 7：对牙釉质形成的影响。

• DOI: 10.1111/eos.12920
• 发表时间: 2023
• 期刊: European journal of oral sciences
• 影响因子: 1.9
• 作者: Shin M;Matsushima A;Kajiya H;Okamoto F;Ogata K;Oka K;Ohshima H;Bartlett JD;Okabe K.
• 通讯作者: Okabe K.

歯原性細胞を用いたバイオ3Dプリンターによる3次元構造体の作成の試み

尝试使用牙源细胞通过生物 3D 打印机创建三维结构

• 发表时间: 2022
• 作者: 瀧澤秀臣;唐川亜希子;茶谷昌宏;須澤徹夫;池田めぐみ;坂井信裕;畔津佑季;髙橋正皓;浦野絵里;上條竜太郎;槇宏太郎;高見正道;田口雅英，岡 暁子，陶山可奈子，吉本尚平，緒方佳代子，大木 調，尾崎正雄
• 通讯作者: 田口雅英，岡 暁子，陶山可奈子，吉本尚平，緒方佳代子，大木 調，尾崎正雄