メタ16S解析を用いた帝王切開出生児の口腔内細菌叢獲得機序の解明

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本研究は分娩形式に関連した新生児口腔dysbiosisの発生プロセス及び、新生児の正常な口腔内細菌叢形成とは何かを明らかにするために、経時的に新生児口腔内細菌を質的（細菌叢構成）かつ量的（細菌量変動）に解析するものである。出生後3日から7日の新生児から滅菌スワブを用いて唾液を採取し試料とした。試料を緩衝液に懸濁し、ボルテックスで分散・均一化後、連続10倍希釈し、CDC血液寒天培地に接種し、好気および嫌気環境下で細菌培養を行った。培養により得られた細菌のコロニー数から新生児唾液中の細菌量（CFU/mL）を算出した。加えて、ヒト母乳には特有の細菌叢が存在していることが近年の研究で明らかになっており、新生児口腔内細菌叢形成過程にも影響を与えていることが推測される。このことから本研究では、新生児の口腔内擦過サンプルに加えて、滅菌搾乳器で搾乳した母乳も試料とし、母乳中の細菌の量的および質的解析も行っている。結果として、新生児の口腔内擦過サンプルから得られた細菌量は、帝王切開児で平均(2.9 ± 2.7)×10の7乗 CFU/mL、自然分娩児では、平均(1.5 ± 3.2)×10の6乗 CFU/mLであった。母乳中の細菌量は、平均(1.4 ± 1.6) × 10の5乗 CFU/mLであった。現在、細菌叢構成を明らかにするため、細菌16S rRNA遺伝子の配列解析を、新たに構築したPCR-RFLP法を利用した口腔内細菌分類法を用いて行っている。