Orbitrap LC-MS/MSを用いた薬毒物スクリーニングとメタボローム解析

使用 Orbitrap LC-MS/MS 进行药物毒理学筛查和代谢组分析

• 批准号: 21K10514
• 负责人: 奥田 勝博
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K10514/
• 关键词: Orbitrap LC-MS/MS; メタボローム; 薬毒物スクリーニング; ミックスモードカラム; メタボローム解析; オービトラップ

昨年度までに最適化したLC-MS/MSの分離・分析条件を用いて、司法解剖の鑑定のための薬毒物スクリーニングを行いつつ全質量データを採取し、400例を超えるデータを蓄積した。各事例の死因を一酸化炭素中毒、焼死、薬毒物中毒、海水溺水、淡水溺水、高所転落、頭部外傷、窒息（溺水を除く）、内因性急性心機能不全、青壮年突然死症候群（50歳以下）、偶発性低体温症、敗血症、骨折後数日での死亡に分類し、これらに当てはまらないものや複数の要因が競合すると考えられるものはその他とした。解析にはThermo Fisher Scientific社の低分子 LC-MS ソフトウェア　Compound Discovererを用い、代謝物データベースを用いた網羅的解析に加えて、アミノ酸のみまたは脂肪酸のみに対象を絞った解析などいくつかの方法を試みた。死因によって減少傾向にあるいくつかの化合物が見出されたが、その特異性は完全なものではなかった。一見腐敗の影響はないと認められる試料でも明らかに腐敗アミンの生成が進んでいる試料も多く認められた。解析方法開発時には、これらを客観的に排除するための腐敗マーカーの設定が必要であると考えられた。ソフトを用いた網羅的解析では、ピークの認識等の問題から目視による確認が必須となり、効率的な改善点が多く課題となった。今後もさらにメタボローム解析を続け、死因診断マーカーとなる化合物の発見を目指す。

使用直到去年优化的LC-MS/MS分离和分析条件，在进行法医解剖结构进行药物毒素筛查时收集了总质量数据，并积累了400多个病例的数据。每种情况下死亡的原因均分类为一氧化碳中毒，燃烧死亡，毒品中毒，溺水，淡水溺水，高空降低，头部受伤，窒息（不包括溺水），内源性心脏功能障碍，中间儿童突然死亡综合症，中等儿童（Ages）在50岁以下（年龄在50岁以下），造成50岁以下的疾病，造成了一定的刺激性，是偶然的招募，是偶然的招呼，偶然的招致。这些情况或被认为与多种因素竞争的情况不包括在内。分析是使用Thermo Fisher Scientific的Compound Discover，一种小分子LC-MS软件进行的，除了使用代谢物数据库进行全面分析外，还尝试了几种方法，包括仅针对氨基酸或脂肪酸的靶向分析。由于死亡原因，发现几种化合物正在减少，但其特异性并不完美。尽管显然不受腐败影响的样本，但许多样本清楚地表明了变质胺的产生进展。人们认为，在开发分析方法时，有必要设定腐败标记以客观地消除这些标记。在使用软件的综合分析中，由于诸如识别峰值之类的问题，并且许多有效的改进已成为一个挑战，因此视觉确认已成为必要。我们将继续进行代谢组分析，并旨在发现可以作为死亡原因标记的化合物。

项目成果

液体クロマトグラフ－電場型フーリエ変換質量分析計およびミックスモードカラムを用いた薬毒物スクリーニング法の検討

液相色谱-电场型傅里叶变换质谱仪和混合模式柱的药物筛选方法检验

• 发表时间: 2021
• 作者: 奥田 勝博;浅利 優;髙橋 悠太;森 香苗;難波 亮; 清水 惠子
• 通讯作者: 清水 惠子