Molecular mechanisms for resistance to kinase inhibitors in soft tisuue sarcomas

软组织肉瘤对激酶抑制剂耐药的分子机制

基本信息

批准号：
20K07415
负责人：
齋藤剛
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

染色体非転座型の肉腫検体から得られたRNAシークエンスデータを解析し、従来は融合遺伝子陰性腫瘍とされてきた肉腫の中に相当数（15%程度）のチロシンキナーゼ受容体を含む融合遺伝子を有するものが存在することを見出した。多くはout-of-frameであったが、一部はin-frame fusionであったことから、融合遺伝子形成に繋がる染色体転座という現象は実際のところかなり多くの肉腫で起こっていることが推察された。一方、in-frame fusionについては、RT-PCRによる融合遺伝子の確認とともに融合遺伝子に含まれるチロシンキナーゼ受容体のタンパク質発現を免疫染色でも確認することが出来た。これらのチロシンキナーゼ受容体を含む融合遺伝子については、一部について機能解析も行い、腫瘍形成能やチロシンキナーゼ阻害剤による抗腫瘍効果についても確認した。研究成果の一部は学術論文として投稿中である。また一方で、チロシンキナーゼ受容体に対する有用な免疫染色抗体がないため見過ごされていたが、前年度までの研究により肉腫にもチロシンキナーゼ受容体を含む融合遺伝子腫瘍が潜んでいる可能性が示唆された。今年度はチロシンキナーゼ受容体を含む融合遺伝子の効率的な検出方法について探索し、その１つにNanoStringを用いたRNAレベルでの遺伝子発現不均衡解析を試みた。これはチロシンキナーゼ受容体遺伝子の5'-サイドと3'-サイドに各々プローブ設定を行い、その発現量の違いを調べることから融合遺伝子形成の可能性を探索するものであるが、融合遺伝子形成の多様性からこの解析方法では検出出来ないような例や偽陽性となってくる症例もかなりあることもわかり、融合遺伝子形成の最終産物としての免疫染色による検出方法に加え、遺伝子発現不均衡解析にもプローブ設定の位置や数について次年度に向けて修正を加えていく必要性を感じている。

分析了从非转移的肉瘤试样获得的RNA测序数据，并发现在以前被认为是阴性融合基因肿瘤的肉瘤中，其中一些肿瘤基因含有相当数量（约15％）的酪氨酸激酶受体。大多数是框架之外，但有些是框架融合，因此可以推断出导致融合基因形成的染色体易位现象实际上发生在相当多的肉瘤中。另一方面，在框内融合的情况下，通过RT-PCR证实了融合基因，并且可以通过免疫染色来证实融合基因中包含的酪氨酸激酶受体的蛋白表达。对其中一些含有酪氨酸激酶受体的融合基因进行了功能分析，还确认了酪氨酸激酶抑制剂的致瘤能力和抗肿瘤作用。目前，一些研究结果正在作为学术论文提交。另一方面，尽管这被忽略了，因为没有针对酪氨酸激酶受体的有用的免疫染色抗体，但是直到上一年之前的研究表明，含有酪氨酸激酶受体的融合基因肿瘤也可能隐藏在肉瘤中。今年，我们探索了含有酪氨酸激酶受体的融合基因的有效检测方法，并试图使用纳米串作为其中之一来分析RNA水平的基因表达失衡。这涉及通过在酪氨酸激酶受体基因的5侧和3'侧设置探针来搜索融合基因形成的可能性，并检查其表达水平的差异，但是很明显，在许多情况下，在许多情况下无法使用这种分析方法或发现错误的阳性的情况来检测到它。除了使用免疫染色作为融合基因形成的最终产物的检测方法外，我们还认为需要在基因表达不平衡分析中修改明年的探测设置的位置和数量。

项目成果

期刊论文数量（2）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

A case of primary distal-type epithelioid sarcoma of the lumbar vertebra with a review of literature

原发性腰椎远端型上皮样肉瘤一例并文献复习

DOI：
10.1007/s00428-020-02955-w
发表时间：
2020
期刊：
Virchows Archiv
影响因子：
3.5
作者：
Ura Ayako;Saito Tsuyoshi;Motoi Toru;Takagi Tatsuya;Suehara Yoshiyuki;Kurihara Taisei;Sano Kei;Sasa Keita;Hayashi Takuo;Yao Takashi
通讯作者：
Yao Takashi

Identification of a Novel MAN1A1-ROS1 Fusion Gene Through mRNA-based Screening for Tyrosine Kinase Gene Aberrations in a Patient with Leiomyosarcoma