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Functional and structural analysis of a novel protease YabG specifically conserved in spore-forming bacteria

孢子形成细菌中特异保守的新型蛋白酶 YabG 的功能和结构分析

基本信息

批准号：
20K07490
负责人：
山澤龍治
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Setsunan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

枯草菌YabGの組換え体YabGは芽胞形成菌に存在する34 kDaのタンパク質をコードする遺伝子で、芽胞殻に含まれる芽胞形成タンパク質をプロセシングするプロテアーゼであることが報告されている。既存のプロテアーゼとの相同性は低く、MEROPSデータベースの分類はfamily U57（unknown catalytic type）で、触媒機構等は不明であった。これまでに組換え体を用いてYabGがアルギニンのC末端側を加水分解するエンド型システインプロテアーゼであることを明らかにした。さらにSporopainがLys基質に対して活性が無い、Arg特異的であることを明らかにした。これはMEROPSデータベースに登録されている113種のシステインプロテアーゼのファミリーのいずれとも配列が一致しない、新規のシステインプロテアーゼであることを明らかにし、我々はYabGを「Sporopain」と命名した。Sporopainの活性中心付近の配列はClan CD に属する酵素群と配列が類似することから、Sporopain はClan CDに属すると考えられる。Sporopainは全長35 kDaで発現したあと、自己分解することで、一旦24-kDa 中間体になり、その後、数 kDa に自己分解する。35 kDa全長体から24 kDa中間体に自己分解する際には、5つの中間体があることがSDS-PAGEで確認できた。これらの中間体はN末シークエンス解析の結果より、YabGのN末端側のArg5、Arg17、Arg49、Arg93のC末端側が加水分解されていることを明らかにした（Yamazawa et al., 2021, Kuwana et al., 2022)。

There were 34 kDa spores in YabG spores forming bacteria of Bacillus subtilis, and spores contained spores to form spores that formed spores. The existing information systems are similar to each other, and the MEROPS information systems are classified into family U57 (unknown catalytic type), catalyst institutions, and so on. In this paper, we use the method of adding water to decompose the water at the end of the C-end of the system. We need to know how to use YabG. The Lys base of the Sporopain system is not active, and the Arg feature is not active. In addition, the MEROPS system is required to register one hundred and thirteen types of equipment, and each of them is assigned to the same number of files, the new regulations and regulations, and we use the "Sporopain" name of the YabG. Sporopain active center alignment "Clan CD" belongs to "enzyme group", and Sporopain "Clan CD" is similar to "enzyme group". The total length of Sporopain is 35 kDa, and you can decompose it by yourself. once you lose it in 24-kDa, you will decompose it by yourself after you count kDa. In the 35 kDa full-length body 24 kDa, the body decomposes itself, and in the middle of 5 years, the body is broken down, and the SDS-PAGE is confirmed. The results showed that the N-terminal of YabG, Arg5, Arg17, Arg49, Arg93, C-terminal, hydrolyzed, hydrolyzed, purified (Yamazawa et al., 2021, Kuwana et al., 2022).