Elucidation of the control system of intravenous tumor thrombus formation by long-noncoding RNA in hepatocellular carcinoma

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当該年度においては、前年度に引き続きヌードマウスを使用したin vivo肝転移モデルを利用して、研究項目「in vivo癌転移モデルを用いた長鎖非コードRNAの機能解析」の一環として長鎖ノンコーディングRNAの発現が癌細胞の転移に及ぼす効果を検討した。本検討では、ヒト肝癌細胞HuH-7をヌードマウスの脾臓に移植し、肝臓に腫瘍が形成されるモデルを使用した。肝細胞癌患者の腫瘍栓組織で発現上昇がみとめられた長鎖ノンコーディングRNAであるCRNDEとLINC00665の発現を低下させた細胞を移植して、肝臓での転移巣形成への効果を検討した。発現を低下させた細胞を移植した肝転移モデルマウスでは、肝臓で形成される転移巣の数が減少したが、統計学的有意差はなかった。この移植実験では、移植細胞における遺伝子発現制御が保持されていないことが考えられたことから、恒常的な遺伝子発現制御を達成する方法で長鎖ノンコーディングRNAの発現を低下させた細胞を樹立し、同様にマウスに移植する検討を試みることとした。この検討は、現在までにCRNDE及びLINC00665の発現を低下させた細胞を樹立するまでに至っておらず、継続して実験操作を進めている。一方、計画した研究項目「遺伝子工学的制御による長鎖非コードRNAの機能解析」に関する検討では、CRNDE及びLINC00665の発現低下が細胞の移動や浸潤を抑制する機構に関連する分子種の発現を解析した。その結果、E-cadherinといった細胞の接着に関連する因子、Matrix metalloproteinase（MMP）などの細胞の浸潤に関連する因子の発現変動を複数の肝癌細胞株で検出した。これらの結果は、CRNDE及びLINC00665の発現変動が細胞の接着や移動に関連する因子の発現変動に影響を及ぼすことを示唆しており、長鎖ノンコーディングRNAによる肝癌細胞の転移能の制御に関する機構の一端を担っていると考えられる。