Phactr1遺伝子変異を背景とするウエスト症候群の分子病態メカニズムの解明

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Phactr1はウエスト症候群患者より遺伝子変異が同定された遺伝子であり、これまでに変異タンパク質の性状解析や大脳皮質形成に及ぼす影響について解析して きた。これまでの結果を踏まえて本研究では、PHACTR1変異の臨床的意義に焦点を絞り、患者由来リンパ芽球の生化学・細胞生物学的解析、結合する分子群 (Protein phosphatase 1、KCNT1(小児てんかん性脳症の原因遺伝子))との相互作用等の解析により、ウエスト症候群の分子病態メカニズムの一旦を解明する ことを目的とする。本年度はPHACTR1の発現抑制により引き起こされる大脳皮質神経細胞の移動障害がKCNT1の導入によりレスキューされるかについて検討した。子宮内胎仔脳遺伝子導入法により胎生14日目の神経幹細胞にPHACTR1発現抑制ベクターと野生型KCNT1発現ベクターを導入し、生後0日目、3日目に固定し、神経細胞の配置を観察したが、KCNT1によるレスキュー効果は認められなかった。またKCNT1のRNAiベクターについてオフターゲット効果のないことを確認するためにレスキュー実験を行なったがレスキュー効果が認められず、再度4個のベクターを作成し、その中からCOS7細胞において発現抑制効果が高い2個のベクターを選抜した。