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Phactr1遺伝子変異を背景とするウエスト症候群の分子病態メカニズムの解明

Phactr1基因突变所致West综合征分子病理机制的阐明

基本信息

批准号：
20K08200
负责人：
浜田奈々子
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Institute for Developmental Research Aichi Developmental Disability Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08200/
关键词：
PHACTR1 ウエスト症候群 Phactr1 phactr1 てんかん

项目摘要

Phactr1はウエスト症候群患者より遺伝子変異が同定された遺伝子であり、これまでに変異タンパク質の性状解析や大脳皮質形成に及ぼす影響について解析してきた。これまでの結果を踏まえて本研究では、PHACTR1変異の臨床的意義に焦点を絞り、患者由来リンパ芽球の生化学・細胞生物学的解析、結合する分子群 (Protein phosphatase 1、KCNT1(小児てんかん性脳症の原因遺伝子))との相互作用等の解析により、ウエスト症候群の分子病態メカニズムの一旦を解明することを目的とする。本年度はPHACTR1の発現抑制により引き起こされる大脳皮質神経細胞の移動障害がKCNT1の導入によりレスキューされるかについて検討した。子宮内胎仔脳遺伝子導入法により胎生14日目の神経幹細胞にPHACTR1発現抑制ベクターと野生型KCNT1発現ベクターを導入し、生後0日目、3日目に固定し、神経細胞の配置を観察したが、KCNT1によるレスキュー効果は認められなかった。またKCNT1のRNAiベクターについてオフターゲット効果のないことを確認するためにレスキュー実験を行なったがレスキュー効果が認められず、再度4個のベクターを作成し、その中からCOS7細胞において発現抑制効果が高い2個のベクターを選抜した。

Phactr1 is a syndrome that affects the development and development of the cortex. These results are helpful for understanding the clinical significance of PHACTR1 variation, the biochemical and cellular analysis of the origin of the patient, the interaction between Protein phosphatase 1 and KCNT1, and the molecular pathologies of PHACTR1 syndrome. This year, the inhibition of PHACTR1 expression was initiated and the migration barrier of cortical neurons was investigated. In utero fetal embryo transfer method: PHACTR1 gene expression inhibition in embryonic 14-day-old neural stem cells and wild-type KCNT1 gene expression inhibition in embryonic 0-day-old, 3-day-old fixed, neuronal cell disposition observation, KCNT1 gene expression inhibition. KCNT1 RNAi target was identified as a result of the four additional RNAi targets created, and COS7 cells were identified as a result of the two additional RNAi targets selected.