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Search for the regulatory mechanism of mitochondria by microRNA and long noncoding RNAs

利用microRNA和长链非编码RNA寻找线粒体的调控机制

基本信息

批准号：
20K08266
负责人：
水野洋介
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Saitama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでに、特定のミトコンドリア関連遺伝子をCRISPR/CASでノックアウトしたヒト線維芽細胞と、さらに別の複数のミトコンドリア関連遺伝子をRNA干渉法によりノックダウンしたヒト線維芽細胞を用いた実験を行ってきた。ミトコンドリアの分裂や融合、エネルギー産生能やストレス制御に関わるDNM1L、MFN2、p32等の遺伝子の機能が欠損・抑制された細胞では、ミトコンドリアの伸展、分裂、融合等の形態変化やエネルギー産生能の低下を生じる。こうした細胞ではミトコンドリア機能に関わる非コードRNAの発現量にも大きな変化が生じていると考えられる。このような非コードRNAを同定するため、ヒト培養細胞を用いてDNM1L, MFN2,p32遺伝子をRNA干渉法によりノックダウン、またCRISPRシステムによりノックアウトした細胞からミトコンドリアおよびミトコンドリア内膜内成分（マイトプラスト）を分画して全RNAを抽出した。ミトコンドリア関連遺伝子を抑制させたことの効果として、ミトコンドリアの形態が変化していることを確認した。得られたミトコンドリアRNAについて発現アレイを用いてmRNA、長鎖非コードRNA、マイクロRNAの発現量を定量した結果、ミトコンドリア関連遺伝子の機能を抑制させた場合に、その影響を受けて発現量が変化したミトコンドリアmRNA、長鎖非コードRNA、マイクロRNAを検出することが出来た。ミトコンドリアの分裂や融合に関わる遺伝子を抑制することにより、共通して発現が変動する長鎖非コードRNAやマイクロRNAも複数検出することが出来た。この中に、ミトコンドリア機能を制御したり影響を及ぼし、ひいてはミトコンドリア病の発症要因にもなるRNAが含まれていると考えられるため、引き続き検証実験を実施している。

これまでに、Specific のミトコンドリアrelated legacy 㼝子をCRISPR/CAS でノックアウトしたヒトline-dimensional sprout cell と、さらにdifferent Plural form of RNA interference method The ックダウンしたヒトline-dimensional sprout cell is used by the いた実験を行ってきた. The ミトコンドリアのcleavage and fusion, the エネルギーgenerated energy やストレスcontrol に关わるDNM1L, MFN2, p32 and other legacy sub-machine It can damage and inhibit the expansion, division, fusion and other morphological changes of されたcell では, ミトコンドリアの, etc. やエネルギーproduces energy-reduced の生じる. The cell function of the cell NAの発正quantityにも大きな変化が生じていると考えられる.このような Non-コードRNAを同定するため、ヒトcultured cells を Used いてDNM1L, MFN2, p32 genetic code, RNA interference method, CRISPR method, CRISPRたCell からミコンドリアおよびミトコンドリアIntimal component (マイトプラスト) をdrawing してwhole RNAをextractionした.ミトコンドリアrelated legacy 伝子を suppresses the effect of させたことのとして, ミトコドリアのmorphosisが変化していることをconfirmationした. Get られたミトコンドリアRNAについて発开アレイを用いてmRNA, long lockfeコードRNA, マイクロRNAの発quantificationした results, ミトコンドリアrelated heritage The function of the child is inhibited by the situation, and the influence of the situation is affected by the change of the actual amount.リアmRNA, long lock non-コードRNA, マイクロRNAを検出することが出た.ミトコンドリアのcleavage やfusion に关わる伝子を suppress することにより、同公して発Now が変动する长 lock non-コードRNAやマイクロRNAもplural 検出することが出た.この中に、ミトコンドリア Functional control したり Impact を and ぼし、ひいてはミトコンドリア Disease の発The main cause of the disease is にもなるRNAがまれていると考えられるため, and it is caused by き続き検证実験を実士している.