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Sialic acid-independent infection mechanism of H5N1 highly pathogenic avian influenza viruses

H5N1高致病性禽流感病毒非唾液酸感染机制

基本信息

批准号：
20K08854
负责人：
梶原直樹
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Geriatric Hospital and Institute of Gerontology (2022)Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science (2020-2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、H5N1亜型の高病原性鳥インフルエンザウイルスの感染阻害薬の開発を目標に、シアル酸非依存的な感染経路の分子機構の解明を進めてきた。これまでの研究より、H5亜型のヘマグルチニン (HA)に対する抗H5 HA抗体 (3B9および14A7)がH5N1高病原性鳥インフルエンザウイルス (A/Vietnam/UT3040/2004)のシアル酸非依存的な感染を著しく阻害することを見出した。また、組み換えHAタンパク質に対する抗H5 HA抗体の反応性およびHAタンパク質のアミノ酸配列の比較解析より、抗H5 HA抗体のエピトープを同定した。抗H5 HA抗体のエピトープの機能的な重要性を明らかにするため、本年度はまず各種ベクターを構築し、293T細胞とMDCK細胞を用いてリバースジェネティクス法による組換えインフルエンザウイルスの作出を行った。培養上清中に産生されたウイルスを再度、MDCK細胞に感染させ、ウイルスの力価をプラークアッセイにより測定した。次に、免疫細胞染色とフローサイトメトリーを用いて、親株またはシアル酸欠損細胞に対する組み換えウイルスの感染能を評価した。その結果、抗H5 HA抗体 (3B9および14A7)のエピトープにアミノ酸変異を導入した組み換えインフルエンザウイルスでは、シアル酸欠損細胞への感染能が顕著に低下した。すなわち、本年度はH5N1高病原性鳥インフルエンザウイルス (A/Vietnam/UT3040/2004)のシアル酸非依存的な感染におけるHAタンパク質の重要なアミノ酸の同定に成功した。

We aim to elucidate the molecular mechanisms of the highly pathogenic avian influenza A (H5N1) virus infection pathway in order to develop its protective agents and to elucidate its acid-independent pathway. These studies have shown that anti-H5 HA antibodies (3B9 and 14A7) against H5N1 are effective in preventing acid-independent infection of highly pathogenic avian influenza A (A/Vietnam/UT3040/2004). Comparative analysis of the anti-HA antibody reactivity and HA antibody quality for H5HA and the anti-HA antibody quality for HA. The importance of anti-H5HA antibody function has been clearly demonstrated. This year, we will continue to construct various kinds of anti-H5HA antibodies, including 293T cells and MDCK cells. The culture supernatant was produced in the presence of MDCK cells, and the cells were infected with MDCK cells. In addition, the immune cells were stained and the infection ability of the cells was evaluated. As a result, anti-H5 HA antibodies (3B9 and 14A7) were introduced into the cells and their infectivity was reduced. This year, H5N1 highly pathogenic avian influenza A (A/Vietnam/UT3040/2004) and its acid-independent infection were successfully identified.