Sialic acid-independent infection mechanism of H5N1 highly pathogenic avian influenza viruses

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我々は、H5N1亜型の高病原性鳥インフルエンザウイルスの感染阻害薬の開発を目標に、シアル酸非依存的な感染経路の分子機構の解明を進めてきた。これまでの研究より、H5亜型のヘマグルチニン (HA)に対する抗H5 HA抗体 (3B9および14A7)がH5N1高病原性鳥インフルエンザウイルス (A/Vietnam/UT3040/2004)のシアル酸非依存的な感染を著しく阻害することを見出した。また、組み換えHAタンパク質に対する抗H5 HA抗体の反応性およびHAタンパク質のアミノ酸配列の比較解析より、抗H5 HA抗体のエピトープを同定した。抗H5 HA抗体のエピトープの機能的な重要性を明らかにするため、本年度はまず各種ベクターを構築し、293T細胞とMDCK細胞を用いてリバースジェネティクス法による組換えインフルエンザウイルスの作出を行った。培養上清中に産生されたウイルスを再度、MDCK細胞に感染させ、ウイルスの力価をプラークアッセイにより測定した。次に、免疫細胞染色とフローサイトメトリーを用いて、親株またはシアル酸欠損細胞に対する組み換えウイルスの感染能を評価した。その結果、抗H5 HA抗体 (3B9および14A7)のエピトープにアミノ酸変異を導入した組み換えインフルエンザウイルスでは、シアル酸欠損細胞への感染能が顕著に低下した。すなわち、本年度はH5N1高病原性鳥インフルエンザウイルス (A/Vietnam/UT3040/2004)のシアル酸非依存的な感染におけるHAタンパク質の重要なアミノ酸の同定に成功した。