Functional analysis of salt-inducible kinase and steroid-producing tissues by targeted proteomics and mass spectrometry

通过靶向蛋白质组学和质谱法对盐诱导激酶和类固醇产生组织进行功能分析

• 批准号: 20K08867
• 负责人: 秦野 修
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08867/
• 关键词: 塩誘導キナーゼ; AlphaScreen 法; 標的プロテオミクス; ステロイドホルモン産生; 質量分析法; Salt-Inducible Kinases; コムギ胚芽無細胞タンパク質合成; 卵巣; 女性生殖機能; ステロイドホルモン産生組織; コムギ胚芽無細胞タンパク質合成系; ステロイドホルモン

塩誘導キナーゼ（Salt-Inducible Kinases: SIK1,2,3)はAMPKファミリーに属し、SIK1,2,3 の各欠損/変異マウスはステロイドホルモン産生酵素の発現異常、生殖異常、代謝異常、軟骨形成異常、睡眠異常、虚血性疾患などの多彩な異常を呈する。これら多様な表現型異常に関与する SIK1,2,3 の機能発現機構を明らかにする目的で、SIK1,2,3 に結合するタンパク質について、ヒト転写因子群、シグナル伝達関連分子群等から、in vitro での網羅的なスクリーニングを行った。ヒトSIK1,2,3 各種の全長タンパク質をコムギ胚芽無細胞系で合成し、ビオチン化を行った後、愛媛大学プロテオサイエンスセンターが構築した約8,300種のヒトタンパク質アレイ（転写因子等のDNA結合タンパク質:1,334種、プロテインキナーゼ群:483種、epigenetic 関連因子:861種などを機能種別にほぼ網羅的に含む）から AlphaScreen 法を用いて、SIK1,2,3 各種の全長タンパク質との結合実験を行ない、SIK1,2,3 各種に強く結合するヒトタンパク質を、各々約20種同定した。又、これらの Alphascreen 結合実験は、in vitro で合成されたタンパク質同士の結合スクリーニングであるが、より生体（in vivo）に近い培養細胞中での、SIK1,2,3 の相互作用タンパク質を同定するために、SIK1,2,3 の各全長タンパク質に、最近、開発された近接依存性ビオチン化酵素(AirID)を連結した発現プラスミドを構築し、培養細胞条件下における塩誘導キナーゼの結合/相互作用タンパク質の同定の準備を行っている。

Salt-Inducible Kinases: 1, 2,3 Abnormal expression of enzyme producing enzymes, reproductive abnormalities, metabolic abnormalities, chondrogenesis abnormalities, sleep abnormalities, and blood deficiency disorders. These diverse phenotypic abnormalities are related to the functional development mechanisms of 1,2, and 3 for clear purposes, and 1,2, and 3 are combined with, factor groups, related molecular groups, etc., and are implemented in the vitro. Ehime University has constructed about 8,300 kinds of full-length embryo cell-free lines, including 1,2,3 kinds of full-length embryo cell-free lines, 3 kinds of full-length embryo cell-free lines, and 4 kinds of full-length embryo cell-free lines. DNA binding factors:1,334 species, DNA binding factors:483 species, epigenetic correlation factors:861 kinds of functional categories include AlphaScreen method, 1,2, 3 kinds of full-length categories, 1,2, 3 kinds of strong categories, 2, 3 kinds of strong categories, each of which has about 20 kinds of same characteristics. In addition, the Alphascreen binding process is in vitro, synthesis is in progress, and the interaction between alpha 1, alpha 2, alpha 3 and alpha 1, alpha 2, alpha 3 is in vivo, and the interaction between alpha 1, alpha 2, alpha 3 and alpha 3 is in vivo. Under the condition of culture cells, the binding/interaction between the two substances can be induced.

项目成果

創薬研究のためのスクリーニング学実践テキスト 第3章-7. Alpha技術 による HTS

使用 Alpha 技术进行药物发现研究筛选科学的实用文本第 3-7 章。

• 发表时间: 2022
• 作者: 佐藤幸市;茂木千尋;Alan J. Mighell;岡島史和;竹田浩之
• 通讯作者: 竹田浩之

The new live imagers MitoMM1/2 for mitochondrial visualization.

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2021.05.040
• 发表时间: 2021-05
• 期刊: Biochemical and biophysical research communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Miwa Maeda;Mayu Suzuki;S. Takashima;Tsutomu Sasaki;K. Oh‐hashi;H. Takemori

University of Illinois at Chicago(米国)

伊利诺伊大学芝加哥分校（美国）

Zebrafish as a new model for rhododendrol-induced leukoderma.

斑马鱼作为杜鹃醇诱导的白皮病的新模型。

• DOI: 10.1111/pcmr.13005
• 发表时间: 2021
• 期刊: Pigment Cell Melanoma Res.
• 作者: Hayazaki M;Hatano O;Shimabayashi S;Akiyama T;Takemori H;Hamamoto A.
• 通讯作者: Hamamoto A.

A chalcone derivative suppresses TSLP induction in mice and human keratinocytes through binding to BET family proteins

查尔酮衍生物通过与 BET 家族蛋白结合抑制小鼠和人类角质形成细胞中 TSLP 的诱导

• DOI: 10.1016/j.bcp.2021.114819
• 发表时间: 2021
• 期刊: Biochemical Pharmacology
• 影响因子: 5.8
• 作者: Segawa Ryosuke;Takeda Hiroyuki;Yokoyama Takeshi;Ishida Momoha;Miyata Chihiro;Saito Taiji;Ishihara Ryosuke;Nakagita Tomoya;Sasano Yusuke;Kanoh Naoki;Iwabuchi Yoshiharu;Mizuguchi Mineyuki;Hiratsuka Masahiro;Hirasawa Noriyasu
• 通讯作者: Hirasawa Noriyasu