Elucidation of the novel function of trophoblast DROSHA as a novel therapeutic strategy for preventing congenital viral infection

阐明滋养层 DROSHA 的新功能作为预防先天性病毒感染的新治疗策略

• 批准号: 20K09611
• 负责人: 瀧澤 俊広
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09611/
• 关键词: 産科学; 妊娠; 胎盤; DROSHA

この研究は、DROSHAの胎盤における新しい機能解明を目指す基盤研究であり、栄養膜細胞におけるDROSHAの新機能、特に周産期ウイルス感染症に関連した新しいウイルス防御機構の解明と、DROSHAに結合している胎盤由来ノンコーディングRNA（ncRNA）、コーディングRNA（mRNA）の役割、異常妊娠での病態を明らかにすることを目的としている。風疹モデルウイルスとしてシンドビスウイルスを感染させた胎盤栄養膜細胞株BeWoモデルの作製・解析を行った。BHK-21細胞を培養、GFP-シンドビスウイルスを感染させ、培養上清（シンドビスウイルス液）を作製し、ウイルス力価（PFU/ml）を算出した。BeWo細胞を24 well-plateへ播種し、シンドビスウイルス液を用いてMOI（多重感染度）系列・感染時間系列を作製しGFP陽性細胞数から最適条件を決定し、DROSHAの免疫組織化学、およびtotal RNA抽出・PCR解析を行った。免疫組織化学解析により、シンドビスウイルス感染したGFP陽性BeWo細胞のDROSHAは、核だけでなく、細胞質に陽性に認めた。一方、シンドビスウイルス感染していないGFP陰性BeWo細胞のDROSHAは核内に留まったままであった。栄養膜細胞のDROSHAが、ウイルス感染により、細胞質に移行することをはじめて見出した。このことは、栄養膜細胞は、一本鎖プラス鎖RNAウイルス感染により、哺乳類が持つ主要なウイルス防御（インターフェロン）以外に、miRNA生合成酵素であるDROSHAが、細胞質に移動し、抗ウイルス作用（ウイルス複製抑制）を発揮している可能性が示唆された。PCR解析から、シンドビスウイルス感染BeWo細胞において、胎盤特異的miRNAの発現は増加していた。一方、fCLIP解析より見出したDROSHAに結合しているnon-coding RNAであるVTRNA1-1（オートファジーのリボレギュレーター）の発現量には変化がなかった。VTRNA1-1を介したウイルス防御機構（オートファジー）のさらに詳細な解析が必要である。

こ の research は, DROSHA の placenta に お け る new し い function interpret を refers で す base plate research あ り, tech students.their ownship membrane cells に お け る DROSHA の new function, special に foreign-born ウ イ ル ス adapting just-in-time inventory に masato even し た new し い ウ イ ル ス defense agency の interpret と, DROSHA に combining し て い る placental origin ノ ン コ ー デ ィ ン グ RNA ( NcRNA), コ ー デ ィ ン グ RNA (mRNA) cut の service, abnormal pregnancy で の pathological を Ming ら か に す る こ と を purpose と し て い る. Rubella モ デ ル ウ イ ル ス と し て シ ン ド ビ ス ウ イ ル ス を infection さ せ た placenta tech students.their ownship keep membrane cell lines BeWo モ デ ル の cropping systems, analytical line を っ た. BHK cells - 21 を cultivation, GFP - シ ン ド ビ ス ウ イ ル ス を infection さ せ, culture supernatant (シ ン ド ビ ス ウ イ ル ス liquid) を as し, ウ イ ル 価 ス force (PFU/ml) を calculate し た. BeWo cells を 24 well - plate へ seeding し, シ ン ド ビ ス ウ イ ル ス liquid を with い て MOI (multiple infection degrees) series, the infection time series を cropping し GFP positive cells number か ら を decided し optimum conditions, DROSHA の immunohistochemical, お よ び total RNA extraction, PCR line analytical を っ た. Immunohistochemical parsing に よ り, シ ン ド ビ ス ウ イ ル ス infection し た GFP positive BeWo cells の DROSHA は, nuclear だ け で な く, cytoplasm に positive に め た. Party, シ ン ド ビ ス ウ イ ル ス infection し て い な い GFP negative BeWo cells の DROSHA は に stay within the nuclear ま っ た ま ま で あ っ た. Tech students.their ownship keep membrane cells の DROSHA が, ウ イ ル ス infection に よ り, cytoplasmic に transitional す る こ と を は じ め て shows し た. こ の こ と は, tech students.their ownship は membrane cells, a lock プ ラ ス lock RNA ウ イ ル ス infection に よ り, mammals が つ main な ウ イ ル ス defense (イ ン タ ー フ ェ ロ ン) outside に, micrornas biosynthesis enzyme で あ る DROSHA が, cytoplasm に mobile し, fight ウ イ ル ス role (ウ イ ル ス replication inhibition) を 発 swing し て い が る possibility Sot された. PCR analytic か ら, シ ン ド ビ ス ウ イ ル ス infection BeWo cells に お い て, placenta specific micrornas の 発 now は raised し て い た. Out side, fCLIP analytic よ り し た DROSHA に combining し て い る non - coding RNA で あ る VTRNA1-1 (オ ー ト フ ァ ジ ー の リ ボ レ ギ ュ レ ー タ ー) の 発 now quantity に は variations change が な か っ た. VTRNA1-1を Introduction たウ たウ トファジ ス ス Defense agency (<s:1> トファジ トファジ) さらに さらに detailed な analysis が necessary である.

项目成果

王 じゅん曉、野口 隼矢、瀧澤 敬美、三沢 彩、羅 善順、瀧澤 俊広

王俊熙、野口早哉、泷泽高美、三泽绫、罗青春、泷泽敏宏

• 发表时间: 2021
• 作者: 田中 勇太朗;岡田 淳志;丸山 美帆子;田口 和己;濵本 周造;森 勇介;郡 健二郎;安井 孝周;マウス胎盤特異的 lncRNA 1600012P17Rik の組織化学解析
• 通讯作者: マウス胎盤特異的 lncRNA 1600012P17Rik の組織化学解析

絨毛外栄養膜細胞に高発現しているmiR-675-5pは転写調節因子GATA2の抑制を介してMMP13/MMP14の発現を上昇させ細胞浸潤を促進する

miR-675-5p 在绒毛外滋养层细胞中高表达，可增加 MMP13/MMP14 的表达，并通过抑制转录调节因子 GATA2 促进细胞侵袭。

• 发表时间: 2021
• 作者: 小古山 学;大口 昭英;高橋 宏典;松原 茂樹;瀧澤 俊広
• 通讯作者: 瀧澤 俊広

胎盤栄養膜細胞株（BeWo）由来細胞外粒子の解析

胎盘滋养层细胞系 (BeWo) 细胞外颗粒的分析

• 发表时间: 2023
• 作者: Matsui H;Iriyama T;Sayama S;Inaoka N;Suzuki K;Yoshikawa M;Ichinose M;Sone K;Kumasawa K;Nagamatsu T;Fujisawa T;Naguro I;Ichijo H;Fujii T;Osuga Y.;野口 隼矢，斗澤 昇平，櫻井 孝信，高橋 宏典，大口 昭英，藤原 寛行，瀧澤 俊広
• 通讯作者: 野口 隼矢，斗澤 昇平，櫻井 孝信，高橋 宏典，大口 昭英，藤原 寛行，瀧澤 俊広

Non-coding RNAs in extravillous trophoblast cells. (Symposium 4: Prediction & Prevention of PE)

绒毛外滋养层细胞中的非编码 RNA。

• 发表时间: 2021
• 作者: Toshihiro Takizawa;Manabu Ogoyama;Hironori Takahashi;Akihide Ohkuchi
• 通讯作者: Akihide Ohkuchi

ヒト胎盤高発現lncRNAの妊娠高血圧腎症胎盤における発現解析

人胎盘高表达lncRNA在子痫前期胎盘中的表达分析

• 发表时间: 2020
• 作者: 小古山 学;王 じゅん曉;趙 東威;高橋 宏典;松原 茂樹;大口 昭英;瀧澤 俊広
• 通讯作者: 瀧澤 俊広