遺伝子発現解析によるインフルエンザワクチンのin vitro安全性評価法の構築

利用基因表达分析构建流感疫苗体外安全性评价方法

• 批准号: 20K12727
• 负责人: 百瀬 暖佳
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K12727/
• 关键词: in vitro評価系; ワクチン

ワクチンは一般的に健康な人に予防的に接種されるため、我が国においては有効性のみならず安全性が特に重要視される。人に接種されるワクチンの安全性は従来、動物実験等により評価されてきた。投与後の動物に体重減少等を認めたワクチンは経験的に副作用が多いとされており、動物実験では主に動物の生体反応を安全性の指標としていた。一方、近年では厳重な管理の下で高品質なワクチンが製造できるようになり、動物実験は削減や改良が求められている。我々は、体重減少等の生体反応に先立って動物の組織内で遺伝子発現が変動することを想定して検討を行い、インフルエンザワクチンの安全性を評価するためのマーカーとなる遺伝子群を同定している。本研究課題ではこれらマーカー遺伝子を用いたin vitro評価系の構築を目標としている。2022年度はin vitro評価系に用いる細胞株の再選定と、遺伝子発現解析法の簡便化を検討した。細胞株の再選定あたってはワクチン添加に応答して培養上清中へ放出されるケモカインも評価し、取扱いが容易でワクチンへの応答性がより安定している細胞株への変更を行った。マーカー遺伝子との発現量比の観点から、新しい細胞株を用いたアッセイでは内標準遺伝子をHPRT1からGAPDHへ変更した。遺伝子発現解析では細胞からのRNA精製ステップが煩雑で誤差を生じやすいため、細胞ライセートから直接マーカー遺伝子の発現を解析するためのバリデーションを行った。細胞ライセートから2ステップRT-PCR法による解析を行った場合、total RNAをテンプレートとした場合と比較して同等の結果を得ることができた。

ワ ク チ ン は general に health に な people to prevent に vaccination さ れ る た め, I が に お い て は have sharper sex の み な ら ず security が に important visual さ れ る. Human に vaccination されるワ チ チ <s:1> <s:1> safety されるワ 従, animal experiments, etc. によ チ review 価されて た た た. Cast and に の animals after weight loss を recognize め た ワ ク チ ン は 経 験 に side effects more than が い と さ れ て お り, animal be 験 で は primary に animals born の body reverse 応 を safety の index と し て い た. Side, in recent years, で は 厳 under heavy な management の で high-quality な ワ ク チ ン が manufacturing で き る よ う に な り, animal be 験 は cut や improved め が o ら れ て い る. I 々 は, weight loss etc. の body against 応 に first set っ て animal の で within heritage 伝 son 発 が now - move す る こ と を scenarios し て beg を 検 い, イ ン フ ル エ ン ザ ワ ク チ ン の を safety review 価 す る た め の マ ー カ ー と な る heritage 伝 subgroup を with fixed し て い る. This research topic で は こ れ ら マ ー カ ー heritage 伝 son を with い た in vitro evaluation of 価 is の build を target と し て い る. in 2022, the <s:1> in vitro evaluation of the 価 line に was re-selected using the <s:1> る cell line <e:1>, and the と and 伝 seed development analysis method was used to simplify the を検 discussion on the た. Cell lines の again selected あ た っ て は ワ ク チ ン add に 応 answer し て in culture supernatant へ release さ れ る ケ モ カ イ ン も review 価 し, take Cha い が easy で ワ ク チ ン へ の 応 a sexual が よ り settle し て い る cell lines へ の line - more を っ た. マ ー カ ー posthumous son 伝 と の 発 now than の 観 point か ら, new し を use い い cell lines た ア ッ セ イ で は standards within the heritage 伝 son を HPRT1 か ら GAPDH へ - more し た. Posthumous son 伝 発 now parse で は cells か ら の RNA refined ス テ ッ プ が vexed 雑 で error を raw じ や す い た め, cell ラ イ セ ー ト か ら directly マ ー カ ー heritage 伝 son の 発 now を parsing す る た め の バ リ デ ー シ ョ ン を line っ た. Cell ラ イ セ ー ト か ら 2 ス テ ッ プ rt-pcr method に よ る parsing line を っ た occasions, total RNA を テ ン プ レ ー ト と し た occasions と compare し て equally the result of の を る こ と が で き た.