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STILによるタイトジャンクション減弱機構の解明と非浸潤性乳管癌病理診断への応用

STIL阐明紧密连接衰减机制及其在导管原位癌病理诊断中的应用

基本信息

批准号：
20K16205
负责人：
伊藤秀明
金额：
$ 2.16万
依托单位：
Aichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

乳癌をはじめとする癌細胞では、細胞接着の減弱及び細胞極性の喪失により浸潤が引き起こされると考えられている。特に、非浸潤性乳管癌では、細胞接着の減弱化やそれに伴う細胞極性の喪失が浸潤性乳管癌に至る過程で生じていると考えられている。しかし、その分子メカニズムはこれまでほとんど明らかにされていない。我々は乳癌で発現が亢進しているヘッジホッグ関連因子かつ中心小体複製関連因子であるSTIL（SCL/TAL1 interrupting locus）がTRAF4を介してタイトジャンクションの減弱を引き起こしていると考えられる知見を得た。本研究では、STILによるタイトジャンクション減弱機構を分子細胞生物学的手法と病理組織学的解析の両面から明らかにし、病理組織診断におけるこれまでにない非浸潤性乳管癌の浸潤リスク評価法の確立を目指している。これまでに、乳癌を含む培養細胞を用いてProximity ligation assay(PLA法）及び免疫沈降法を施行することによりSTIL-TRAF4の結合をin situおよびin vitroで確認している。これらの成果は、細胞中でSTIL-TRAF4が複合体を形成していること示唆する結果である。昨年度、タイトジャンクションの減弱メカニズムに、STILによるCortactinのタイトジャンクションへの集積及びリン酸化が関与していると考えられたため、STILとCortactinの複合体形成能について免疫沈降法を中心に解析を進めた。またCortactinの活性化型変異体および不活性化型変異体を作製し、解析を追加した。病理組織の解析については、微小浸潤癌や非浸潤性乳管癌を中心に解析を進めた。

Breast cancer is caused by the weakening of cell adhesion and loss of cell polarity. In particular, non-invasive breast cancer is characterized by subsequent attenuation of cells and loss of cell polarity. This is the first time I've ever seen a woman. We found that breast cancer development was enhanced by SCL/TAL1 interrupting locus, which was associated with centrosome replication. This study aims to establish an invasive assessment method for noninvasive breast cancer by means of molecular cell biology and histopathological analysis. The binding of STIL-TRAF4 was confirmed in situ and in vitro by the Proximity Ligation Assay(PLA) and the Immunosedimentation Assay. The STIL-TRAF4 complex is formed in the cell. In the past year, STIL and Cortactin complex formation energy were analyzed by immunoprecipitation method. The active and inactive variants of Cortactin were produced and analyzed. Pathological analysis of microinvasive carcinoma and noninvasive breast carcinoma