权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

Epigenetic changes in the central nervous system and peripheral blood of offspring rats exposed to VPA during fetal life.

胎儿期暴露于 VPA 的子代大鼠中枢神经系统和外周血的表观遗传变化。

基本信息

批准号：
20K16678
负责人：
金城智也
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16678/
关键词：
バルプロ酸 PBMC ADHD acetylation コアヒストンタンパク質 HDACi RNAseq HDAC1

项目摘要

抗てんかん薬のバルプロ酸ナトリウム(VPA)を妊娠中服薬していた妊婦から生まれた児は発達遅延とともに注意欠陥多動性障害(ADHD)リスクの上昇が指摘されている。本研究ではその診断補助の基礎研究として、動物実験において末梢血と中枢神経のエピジェネティクス学的関係性の解明を目的とした。妊娠12.5日目のラットにVPA(200mg/kg)を連日腹腔内投与し、生後4週齢及び20週齢の仔ラットを研究対象とした。行動実験は4週齢のみ行い、血液由来サンプル（全血 or PBMC）と脳由来サンプル（灌流固定した脳組織 or 未固定の海馬）を回収した。20週齢のラットに関しては、灌流固定した脳組織のみを使用した。初めに、回収した全血及び海馬由来のRNAサンプルを用いてRNA-seq解析を行った。その結果、血液由来RNAサンプルに関してはヘモグロビン関連遺伝子の影響はあったものの、個体差は比較的少なく、重要な遺伝子の発現変動が観察された。しかしながら、海馬由来RNAサンプルに関しては、個体差が激しく、根本的な問題が示唆された。これは脳組織から海馬を分離する際に生じた刺激が影響しているのではないかと推測された。次に、ヒストン修飾を評価するために、脳組織では免疫蛍光組織染色を行い、PBMCではコアヒストンタンパク質を精製後、ウエスタンブロッティングを行った。それぞれの実験系において、アセチル化ヒストンに対する抗体を用いてヒストンテールのアセチル化を観察した。その結果、胎生期VPA曝露群は、中枢神経と末梢血の両方において、低アセチル化状態であることが観察された。20週齢ラットに関しては、4週齢と同様の傾向であったが、全体的に高アセチル化になっていた。令和4年度の主な実績としては、末梢血において、ヒストン修飾の定量的検出に成功した。さらに行動試験も追加し、胎生期VPA曝露群は多動であることを確認した。

Anti-hyperactivity disorder (ADHD) is a disease that occurs during pregnancy and is associated with increased risk of hyperactivity disorder (ADHD). This study aims to clarify the relationship between the diagnosis and support of animal diseases and the development of central nervous system. VPA(200mg/kg) was administered intraperitoneally on day 12.5 of gestation, at 4 and 20 weeks after birth. During the 4 weeks of operation, blood origin (whole blood or PBMC) and origin (perfusion fixation or unfixation of hippocampus) were recovered. 20 weeks after the start of the study, perfusion was used to stabilize the tissue. RNA analysis of whole blood and hippocampus origin The results, the origin of the RNA, the relationship between the gene and the effect of the gene, the individual differences, the occurrence of important genes, and so on were observed. The hippocampus is the source of RNA, and the individual differences are the root causes. This is the first time that the hippocampus has been isolated. The next step is to improve the quality of PBMCs by immunizing them. The antibody is used to detect the presence of the virus in the human body. Results: VPA exposure group during prenatal period, central nervous system and peripheral blood circulation were observed. 20-week period, 4-week period, same trend, overall high level, high level The main performance of the company in 2004 was successful in detecting and modifying the amount of blood in the peripheral blood. The action test was added, and the prenatal VPA exposure group was confirmed.