ダウン症候群における病態責任遺伝子の同定を可能にする革新的な細胞モデルの確立

建立创新的细胞模型，能够识别与唐氏综合症病理有关的基因

• 批准号: 20K16891
• 负责人: 吉松 秀隆
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16891/
• 关键词: iPS細胞; ダウン症候群; ゲノム編集; エピジェネティック編集; ゲノム編集技術; エピジェネティック編集技術

本研究では、ダウン症候群に発症する合併症が、21番染色体上のどの遺伝子発現量の増加によって引き起こされるのか、その責任遺伝子を同定することのできる疾患モデル系の樹立を目指す。昨年度、クローニングしてあったヒトXIST cDNAのフラグメントをつなぎ合わせ、その塩基配列を確認することで、正しくXISTカセットを得ることができた。この配列をテトラサイクリン誘導システムのTet応答配列とつなげ、CRISPR/Cas9をもちいて21トリソミーiPS細胞の21番染色体の1本に挿入した。さらにZinc Finger Nucleaseをもちいて、19番染色体のAASV1領域にrtTA配列の挿入を行った。今年度は、このXIST-trisomy 21-iPS細胞にDoxycycline（Dox）を投与して約2週間後（Dox+）、さらにDoxを除去して2週間後（Doxremov）のふたつの状態を作り、これらのiPS細胞における21番染色体上の遺伝子発現をRNA-seqによって確認を行った。21番染色体上の遺伝子発現は、Dox+では期待通りほぼダイソミーと同じ発現量に不活化され、かつDoxremovではこの不活化状態が維持されることが分った。このことは21番染色体がXISTによって不可逆的に不活化されることを示す。次にこのiPS細胞をアストロサイトへと分化誘導を行ったうえで、Dox+、Doxremovでの細胞増殖を観察した。私たちの研究室では、ダウン症アストロサイトでは健常児に比較して明らかに細胞増殖が更新していることを見出している。Doxを投与することでこの細胞増殖が抑制されほぼ健常児レベルまで下がること、Doxremovにおいてはこの抑制が消失することが分った。この遺伝子発現型・表現型のあいだにある矛盾が、アストロサイト異常増殖の原因遺伝子同定につながると思われた。

This study で は, ダ ウ ン syndrome に 発 disease す る complications が, 21 times on chromosome の ど の posthumous son 伝 発 now quantity の raised に よ っ て lead き up こ さ れ る の か, そ の responsibility heritage 伝 を son be す る こ と の で き る disorders モ デ ル is の set を refers す. Last year, ク ロ ー ニ ン グ し て あ っ た ヒ ト XIST cDNA の フ ラ グ メ ン ト を つ な ぎ close わ せ, そ の salt base with column を confirm す る こ と で, positive し く XIST カ セ ッ ト を have る こ と が で き た. こ の match column を テ ト ラ サ イ ク リ ン induced シ ス テ ム の Tet 応 a match column と つ な げ, CRISPR/Cas9 を も ち い て 21 ト リ ソ ミ ー iPS cells の's chromosome 21 の this に scions into し た. Youdaoplaceholder0 Zinc Finger Nucleaseを ち ち て て the にrtTA in the 19 chromosome <s:1> AASV1 domain is arranged in the を row った. This year, youdaoplaceholder2, <s:1> XIST-trisomy 21 - iPS cells に Doxycycline (Dox) を cast and し て (Dox +), after about 2 weeks さ ら に Dox を remove し て after 2 weeks (Doxremov) の ふ た つ の state を り, こ れ ら の iPS cells に お け る 21 times on chromosome の posthumous son 伝 発 now を RNA - seq に よ っ て confirm を line Youdaoplaceholder0. 21 times on chromosome の heritage 伝 発 は now, Dox + で は expect tong り ほ ぼ ダ イ ソ ミ ー と with じ 発 now quantity に inactive さ れ, か つ Doxremov で は こ の inactive state が maintain さ れ る こ と が points っ た. <s:1> と と が chromosome 21 がXISTによって irreversible に inactivation される とを とを とを とを す show す. Time に こ の iPS cells を ア ス ト ロ サ イ ト へ と induction line を っ た う え で, Dox +, Doxremov で の cells raised colonization を 観 examine し た. Private た ち の laboratory で は, ダ ウ ン disease ア ス ト ロ サ イ ト で は health often where に compare し て Ming ら か に cells raised colonization が update し て い る こ と を shows し て い る. Dox を cast with す る こ と で こ の が inhibit cell raised colonization さ れ ほ ぼ health often where レ ベ ル ま で under が る こ と, Doxremov に お い て は こ の inhibition disappear が す る こ と が points っ た. こ の posthumous son 伝 発 type now, phenotype の あ い だ に あ る contradiction が, ア ス ト ロ サ イ ト exceptions raised colonization の reason but 伝 child with fixed に つ な が る と think わ れ た.