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ダウン症候群における病態責任遺伝子の同定を可能にする革新的な細胞モデルの確立

建立创新的细胞模型，能够识别与唐氏综合症病理有关的基因

基本信息

批准号：
20K16891
负责人：
吉松秀隆
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、ダウン症候群に発症する合併症が、21番染色体上のどの遺伝子発現量の増加によって引き起こされるのか、その責任遺伝子を同定することのできる疾患モデル系の樹立を目指す。昨年度、クローニングしてあったヒトXIST cDNAのフラグメントをつなぎ合わせ、その塩基配列を確認することで、正しくXISTカセットを得ることができた。この配列をテトラサイクリン誘導システムのTet応答配列とつなげ、CRISPR/Cas9をもちいて21トリソミーiPS細胞の21番染色体の1本に挿入した。さらにZinc Finger Nucleaseをもちいて、19番染色体のAASV1領域にrtTA配列の挿入を行った。今年度は、このXIST-trisomy 21-iPS細胞にDoxycycline（Dox）を投与して約2週間後（Dox+）、さらにDoxを除去して2週間後（Doxremov）のふたつの状態を作り、これらのiPS細胞における21番染色体上の遺伝子発現をRNA-seqによって確認を行った。21番染色体上の遺伝子発現は、Dox+では期待通りほぼダイソミーと同じ発現量に不活化され、かつDoxremovではこの不活化状態が維持されることが分った。このことは21番染色体がXISTによって不可逆的に不活化されることを示す。次にこのiPS細胞をアストロサイトへと分化誘導を行ったうえで、Dox+、Doxremovでの細胞増殖を観察した。私たちの研究室では、ダウン症アストロサイトでは健常児に比較して明らかに細胞増殖が更新していることを見出している。Doxを投与することでこの細胞増殖が抑制されほぼ健常児レベルまで下がること、Doxremovにおいてはこの抑制が消失することが分った。この遺伝子発現型・表現型のあいだにある矛盾が、アストロサイト異常増殖の原因遺伝子同定につながると思われた。

This study is aimed at identifying the co-morbidities and the development of the disease system by increasing the amount of gene expression on chromosome 21. In the past year, XIST cDNA has been identified as the most important gene in the world. The gene expression of CRISPR/Cas9 was detected by PCR. The gene expression of CRISPR/Cas9 was detected by PCR. The Zinc Finger Nuclease is inserted into the AASV1 domain of chromosome 19. This year, Doxycycline (Dox) was administered to XIST-trisomy 21-iPS cells approximately 2 weeks later (Dox+), and Dox was removed approximately 2 weeks later (Doxremov). The status of Doxycycline (Dox) was determined, and RNA-seq was performed to confirm the gene expression on chromosome 21 of XIST-trisomy 21-iPS cells. The gene expression on chromosome 21 is negative, Dox+ is negative, and the gene expression is negative, Doxremov is negative, and the inactive state is maintained. This is the first time that a chromosome 21 has been irreversibly inactivated. The next generation of iPS cells was observed in cell differentiation, Dox+ and Doxremov. In the laboratory, the growth of cells is relatively stable. Doxremov is the inhibitor of cell proliferation, and the inhibitor of Doxremov is the inhibitor of cell proliferation. The cause of abnormal reproduction is the same as the cause of abnormal reproduction.