エリスロポエチン受容体を介した急性腎障害の新規治療法の開発

开发促红细胞生成素受体治疗急性肾损伤新方法

• 批准号: 20K17268
• 负责人: 中山 陽介
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17268/
• 关键词: SDMA; ADMA; AKI; NO; CKD; DDAH; Erythropoietin; Epo receptor

本研究では急性腎障害時のADMA蓄積がエリスロポエチン受容体低下を介して虚血による腎障害を引き起こすと仮説をたて、エリスロポエチン受容体を標的とした腎障害のマーカー、治療法の開発を目指す。初年度はADMAの構造異性体であるSDMA（HPLC）が初期の腎不全予測の有用なマーカーになることを見出した。治療法の確立と平行し予測マーカーの確立を目指し、SDMAのELISA作成を行った。方法：抗原(SDMA-linker-KLH)を炭酸バッファー(pH9.6) を用いて 5μg/mL に調製し、50μL/wellでプレートに固相化。1% skim/PBS を用いてブロッキング後、抗体価測定。血清希釈液 50μL をプレートに加え、室温 1 時間で反応。次に HRP 標識 anti-MouseIgG(Jackson)10,000 倍希釈液 50μL を加え室温 1 時間反応。発色基質 TMB(ナカライ)50μL 加え、室温 15 分間発色後、1NH2SO4 で停止後、450nm で OD 測定。Day35 の中間採血血清では、前回免疫個体(SM646-648)に比べ抗体価上昇傾向が確認されたため、予定通り追加投与 2 回実施後、Day63 の中間採血血清と共に再度抗体価測定を実施した。結果：Day63 で若干の抗体価上昇が見られるものの、血清希釈倍率 1/200 において、OD が>2.0となっておらず、SDMA に対する抗原認識が弱いことが推測された。linker-BSAにて免疫に変更しても抗体価上昇はKLH時と同様であった。

This study is aimed at the development of ADMA accumulation and treatment in acute renal impairment. Early years of structural heterogeneity of ADMA SDMA (HPLC) and early detection of renal failure useful to see The establishment of parallel detection methods Methods: Antigen (SDMA-linker-KLH) was prepared with 5μg/mL of carbon acid (pH 9.6) and immobilized at 50μL/well. 1% skim/PBS is used to determine antibody levels. 50μL of serum albumin solution was added at room temperature for 1 hour. HRP labeled anti-Mouse IgG (Jackson)10,000 times of HRP solution 50μL added to room temperature for 1 time reaction. Add 50μL of color development substrate TMB(), develop color at room temperature for 15 minutes, stop 1NH2SO4, and measure OD at 450nm. On Day35, serum samples were collected from individuals immunized with SM646 -648, and antibody levels were determined again. Results: On Day 63, some antibody levels were increased, serum HDR was 1/200, OD was>2.0, SDMA was not recognized. Linker-BSA is the same as KLH.