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Mechanism of Chronic Inflammation of Tenocyte and Tendon through Transient Receptor Potential Channels

瞬时受体电位通道导致肌腱细胞和肌腱慢性炎症的机制

基本信息

批准号：
20K18036
负责人：
亀田拓哉
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K18036/
关键词：
tendinopathy TRP inflammation tendon TRPA1

项目摘要

弾発指、上腕骨外側上顆炎、肩関節腱板炎、アキレス腱炎などの腱障害は日常診療で頻繁に遭遇するが、根本的な薬物治療はない。Transient Receptor Potential チャネル(以下TRPs)は様々な環境に反応し、細胞内Ca濃度を上昇させることで、下流にある細胞応答を引き起こす役割を持つ。本研究では腱障害においてTRPチャネルがどのように慢性炎症に関与しているのかを解明する。R2年度では、ヒト腱細胞を購入し、培養が可能であることを確認できた。R3年度では、実験計画の実験Ⅰに相当する手順として、培養した腱細胞にサイトカインを暴露させ、その細胞群からRNA抽出を行い、リアルタイムPCR法を行うことで、標的遺伝子であったTRPs、特にTRPA1の発現が有意に高いことが明らかとなった。更に、TRPA1を作動させる物質を炎症性サイトカインと組み合わせて添加した細胞群からRNA抽出を行い、リアルタイムPCR法を行うことで、細胞外基質の就職遺伝子が変化する事をとらえたため、TRPA1の作動が、炎症によって引き起こされる細胞外基質の変化を修飾する事が示唆された。また、手術の破棄検体からヒト腱細胞を分離、培養する手順について、一般倫理委員会に承認を得た上で、実際に分離培養が可能となり、5検体を収集した。R4年度では、さらに検体数を増やし、7検体を収集できた。炎症下におけるヒト腱細胞を免疫染色し、TRPA1タンパク発現が増強していることを確認した。さらにTRPA1を作動させる物質を炎症性サイトカインと組み合わせる実験系で、ELISA法により、培養液中の細胞外基質を変化させるタンパクが変動する事をとらえた。また、ヒト腱細胞におけるCaイオン流入が、炎症環境下においてのみ、TRPA1作動物質により引き起こされることをとらえられた。以降の動物実験のための倫理委員会の申請を行った。

The treatment of tendinitis, such as supracarpal arthritis, shoulder tendinitis and tendinitis, is frequently encountered in daily diagnosis and treatment. Transient Receptor Potential (TRPs) respond to environmental conditions, increases in intracellular Ca concentration, and downstream cellular responses. This study aims to clarify the relationship between TRP and chronic inflammation. R2-year purchase and culture of tendon cells In the year R3, the implementation of the program was carried out in accordance with the procedures for culturing tendon cells, exposing them, extracting RNA from all cell populations, and performing PCR on target genes, TRPs, and TRPA1. In addition, TRPA1 acts as an inflammatory marker, an inhibitor, an inhibitor, an additive to cell populations, RNA extraction, and PCR. The activity of TRPA1 acts as an inflammatory marker, and the activity of TRPA1 acts as an inhibitor of extracellular matrix modification. The procedure for isolation and culture of tendon cells from surgical specimens was reviewed and approved by the General Ethics Committee. The isolation and culture of tendon cells were reviewed and collected. In R4, the number of samples increased and the number of samples collected increased. Immunostaining of tendon cells under inflammation, TRPA1 protein expression increased and was confirmed. TRPA1 is activated by substances that are inflammatory, cellular and cellular in culture. Tendon cell Ca ~(2 +) influx, TRPA1 activation in inflammatory environment The application of the Ethics Committee for the treatment of animals