発達期における不十分な味覚刺激が味覚伝導路形成に及ぼす影響

マウスの大脳皮質味覚野における味覚刺激時の誘発反応を領域イメージング法にて可視化する実験系を構築した。具体的には、二光子励起顕微鏡を用いた生体イメージングにより、味覚刺激物質投与時の大脳皮質一次味覚野活動を観察する。生体下においてマウスの神経細胞活動を観察するために、緑色カルシウム感受性蛍光タンパク質GFP-based Calcium Calmodulin probe(GCaMP: 細胞や生体分子を蛍光標識する緑色蛍光タンパク質であるGFPを遺伝子工学的に改変させた緑色蛍光Ca2+センサー)をコードする遺伝子をアデノ随伴ウイルスを用いて大脳皮質味覚野に注入し発現させる。このマウスに対し、すでに確立している大脳皮質生体内リアルタイムイメージング法と二光子励起顕微鏡を組み合わせ、神経の応答をCa2+の蛍光輝度の変化としてとらえ、覚醒下において大脳皮質味覚野における神経活動を可視化する実験系の構築を行った。味覚野はマウス側頭部に位置しているため、頭蓋窓を作製することが大変難しく、また顕微鏡下でin vivoで観察するための固定用チャンバーを接着することに難渋した。長期の繰り返しイメージングではなく、頭蓋窓を作製直後にイメージングを行う方法に変更した。また、味刺激は塩酸キニーネとスクロースのみを使用し、味覚誘発反応を取得することを目指していたが、味覚野には味覚マップが存在することが知られており、その他の味質においても同様に実験系を確立していく。ケージ内に真水・味添加水の2つのボトルを設置し、リック解析式二瓶嗜好実験システムを用いてマウスの各ボトルの飲水量を計測することに成功した。

マウスの大脳皮質味覚野における味覚刺激時の誘発反応を領域イメージング法にて可視化する実験系を構築した。具体的には、二光子励起顕微鏡を用いた生体イメージングにより、味覚刺激物質投与時の大脳皮質一次味覚野活動を観察する。生体下においてマウスの神経細胞活動を観察するために、緑色カルシウム感受性蛍光タンパク質GFP-based Calcium Calmodulin probe(GCaMP: 細胞や生体分子を蛍光標識する緑色蛍光タンパク質であるGFPを遺伝子工学的に改変させた緑色蛍光Ca2+センサー)をコードする遺伝子をアデノ随伴ウイルスを用いて大脳皮質味覚野に注入し発現させる。このマウスに対し、すでに確立している大脳皮質生体内リアルタイムイメージング法と二光子励起顕微鏡を組み合わせ、神経の応答をCa2+の蛍光輝度の変化としてとらえ、覚醒下において大脳皮質味覚野における神経活動を可視化する実験系の構築を行った。味覚野はマウス側頭部に位置しているため、頭蓋窓を作製することが大変難しく、また顕微鏡下でin vivoで観察するための固定用チャンバーを接着することに難渋した。長期の繰り返しイメージングではなく、頭蓋窓を作製直後にイメージングを行う方法に変更した。また、味刺激は塩酸キニーネとスクロースのみを使用し、味覚誘発反応を取得することを目指していたが、味覚野には味覚マップが存在することが知られており、その他の味質においても同様に実験系を確立していく。ケージ内に真水・味添加水の2つのボトルを設置し、リック解析式二瓶嗜好実験システムを用いてマウスの各ボトルの飲水量を計測することに成功した。