遊走誘導型CARによる脳疾患治療基盤技術の開発

开发利用迁移引导的CAR治疗脑疾病的基础技术

• 批准号: 21H01735
• 负责人: 河原 正浩
• 金额: $ 10.98万
• 依托单位: National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H01735/
• 关键词: キメラ抗原受容体; 脳疾患; 遊走; シグナル伝達; 細胞治療

昨年度は、遊走誘導型キメラ抗原受容体として、細胞外ドメインに一本鎖抗体、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインにケモカイン受容体もしくは増殖因子受容体を配したコンストラクトを構築し、細胞で安定発現させた。トランスウェル遊走アッセイによる間接的な遊走活性評価を行った結果、増殖因子受容体を用いた遊走誘導型キメラ抗原受容体の方が抗原に応答して高い遊走活性を有していた。本年度は、より直接的に遊走活性を評価する系の構築を目指した。遊走誘導型キメラ抗原受容体発現細胞をマルチウェルプレートに播種し、抗原を添加後に細胞が沈降するのを待ち、インキュベータ内に設置した顕微鏡でタイムラプス撮影を行った。撮影した画像を時系列順に繋げて動画を作成し、細胞形態の経時的な変化を可視化した。その結果、抗原を添加しない場合には、観察時間を通して細胞が比較的丸い形状のままであったのに対して、抗原を添加した場合には、観察時間中に細胞が仮足を伸ばして変形しており、運動性が亢進していることが示された。この抗原依存的な細胞の変形は、トランスウェル遊走アッセイの結果と相関した。以上より、細胞の形態観察による遊走活性の評価系を新たに構築することができた。

去年，将构建体构造为诱导迁移的嵌合抗原受体，其中将单链抗体放置在细胞外结构域中，将趋化因子受体或生长因子受体放置在细胞内结构蛋白和细胞内结构域中，并稳定地表达在细胞中。通过使用Transwell迁移测定法进行间接迁移活性评估，使用生长因子受体迁移诱导的嵌合抗原受体的迁移活性较高，响应于抗原。今年，我们旨在建立一个更直接评估迁移活动的系统。将表达迁移诱导嵌合抗原受体的细胞播种在多层板中，添加抗原后，允许细胞沉降，并在放置在孵化器中的显微镜下进行延时成像。捕获的图像按时间顺序连接以创建视频，并且随着时间的流逝，细胞形态的变化被可视化。结果，当未添加抗原时，整个观察期间的细胞保持相对较各的形状，而当添加抗原时，通过在观察期间拉伸伪足，将细胞变形，表明运动性增加了。这种抗原依赖性的细胞转化与Transwell迁移测定的结果相关。从以上，可以构建一种通过观察细胞形态来评估迁移活性的新系统。

项目成果

次世代創薬研究について

关于下一代药物发现研究

• 发表时间: 2022
• 作者: 平尾佳那絵;佐々木成朗;河原正浩
• 通讯作者: 河原正浩

細胞内蛋白質間相互作用検出法KIPPISの開発

开发 KIPPIS，一种检测细胞内蛋白质-蛋白质相互作用的方法

• 发表时间: 2021
• 作者: 河原正浩;鹿島大揮
• 通讯作者: 鹿島大揮

細胞創製時代のバイオ計測

细胞创造时代的生物测量

• DOI: 10.34565/seibutsukogaku.99.6_291
• 发表时间: 2021
• 期刊: Seibutsu-kogaku Kaishi
• 作者: Kogawa Masato;Nishikawa Yohei;Saeki Tatsuya;Yoda Takuya;Arikawa Koji;Takeyama Haruko;Hosokawa Masahito;河原正浩
• 通讯作者: 河原正浩

チロシンキナーゼ内包型デザイナー受容体の開発

含有酪氨酸激酶的设计受体的开发

• 发表时间: 2023
• 作者: 河原正浩;コンクローントーン タットポーン
• 通讯作者: コンクローントーン タットポーン

モチーフ連結型人工受容体によるシグナル伝達のアラカルト制御

通过基序连接的人工受体对信号转导进行点菜控制

• 发表时间: 2022
• 作者: 河原正浩;中嶋恭子
• 通讯作者: 中嶋恭子