权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

Development of innovative platform for glycoproteomics targeting mucin

开发针对粘蛋白的糖蛋白组学创新平台

基本信息

批准号：
21H02123
负责人：
亀山昭彦
金额：
$ 11.23万
依托单位：
National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

ムチンは疾患バイオマーカー探索において極めて有望な標的であるにも関わらず、解析が難しいため広大な未開拓領域となっている。この難題に挑むためにはどのムチンタンパク質にどのような糖鎖が付加されているか、すなわちタンパク質と糖鎖の両方を網羅的に解析する手法が必要である。申請者はこれまでにムチンの分離分析法と画期的なO結合型糖鎖遊離法（脱離オキシム化法）を開発した。令和4年度は、産総研ヒト糖転移酵素ライブラリーを用いて、コア３のO型糖鎖基本構造を有するスレオニンの糖鎖伸長を行い、各糖転移酵素基質特異性を明らかにしながら各種糖鎖スレオニンを合成し、コア3糖鎖スレオニンライブラリーを調製した。ガラクトースをβ1-3結合で糖鎖伸長する良い酵素が見つからず、主としてβ1-4結合で伸長した糖鎖を合成した。他にフコースやシアル酸を伸長し糖鎖のバリエーションを増大させた。糖鎖構造の同定法については、還元β脱離で得られるアルジトール体を完全メチル化し、逆相HPLCで分離し、溶出液を全て経時的に分画した後、MALDI-QIT-TOF MSで多段階質量分析を行うと、異性体構造も含めた詳細な構造解析が可能であることが判った。混合物ではイオン化が難しい硫酸化糖鎖もこの方法で分析すると強いシグナルを与え構造解析することができた。ライブラリー構築が難しい糖鎖については、このような方法での解析が可能である。ムチンの同定法の開発については、ムチン糖ペプチドの化学的処理により断片化を検討した。得られるペプチド断片には化学修飾が起きており、プロテアーゼによる分解のような単純な加水分解ではないことが判明した。

In order to explore the disease and disease, we should pay close attention to the information that is expected to be discussed, and analyze the information that has not been developed in the field of medical treatment. We need to know how to solve the problem. We need to ask for more information about sugar. Applicants are required to use the O-combined glucose analysis method (de-quarantine method) during the drawing period of the separation analysis method. In the year of 2004, the production of sugar transfer enzymes has been studied, and the basic production of different types of sugar has been tested, and the properties of various sugar transfer enzymes have shown that all kinds of sugar have been synthesized and tested. β 1-3 and β 1-4, β 1-3, β 1-3 and β 1-4, β 1-3 and β 1-4, respectively. He told me that the sugar was stretched, the sugar was stretched, and the sugar was stretched. The results of glucose homology analysis, reduction β separation, reverse phase HPLC separation, separation of dissolution solution, MALDI-QIT-TOF MS multi-stage quantitative analysis, and sex structure analysis were used to determine the accuracy of the analysis. The mixture was analyzed by the method of sulfated sugar and sulfated sugar. I don't know what to do. I don't know. I don't know. I don't know what to do. The same method is used to determine the temperature, sugar and chemical properties of the chemical system. The chemical repair method was used to analyze the chemical properties of the fragments, such as the chemical treatment, the chemical repair, the decomposition, the water decomposition, the decomposition.