Studies on the interaction between changes of molecules in exosomes and the development of enzootic bovine leukosis

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牛伝染性リンパ腫ウイルス（BLV）感染牛のうち、リンパ腫を「発症」するのはわずか1～5%であり、BLV感染量が増加しても発症しない感染牛が圧倒的に多く、発症の原因はいまだ不明である。本研究では、生体の健康状態により変化する、エクソソームが内包する核酸とタンパク質の挙動とリンパ腫発症との相関を解明し、発症に関わる生体内の因子を分子レベルで明らかにする。本年度は、前年度から継続して、以下の研究を進めた。①各地の食肉衛生検査所、家畜保健衛生所、農業共済組合家畜診療所の協力により、BLVに感染していないコントロール健康牛、リンパ腫を発症していないBLV感染牛、リンパ腫発症牛から乳汁と血液を収集し、解析に必要な検体数と検体量を確保した。②牛の個体情報、血液検査・血液生化学データ、感染ウイルス量、等のデータを収集した。③感染ウイルス量の多い「高コピー感染牛」と、「リンパ腫発症牛」の乳汁エクソソームが内包するマーカーを、miRNAおよびmRNAをターゲットとしたマイクロアレイ解析により、コントロール健康牛の乳汁エクソソームが内包するmiRNAおよびmRNAとともに網羅的に探索、比較した。その結果、以下の研究成果を得た。コントロール健康牛、BLV感染牛、リンパ腫発症牛から乳汁、血液を収集、個体情報、臨床所見、等をデータベースに追加できた。高コピー感染牛に特異的な乳汁エクソソームが内包するmiRNAマーカー候補を選択できた。また、リンパ腫発症牛に特異的な乳汁エクソソームが内包するmiRNAマーカー、mRNAマーカーを選択できた。さらに、マーカー候補となった分子を検出するリアルタイムPCR法を確立することができた。