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パラポックスウイルスの病原性を規定する血管内皮増殖因子の各種動物細胞への反応性

血管内皮生长因子的反应性决定了副痘病毒对各种动物细胞的致病性

基本信息

批准号：
18780227
负责人：
猪島康雄
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

パラポックスウイルス(PPV)は,同じ種類のPPVがウシ,ヒツジ,ヤギ,ニホンカモシカに感染するが,症状はウシで軽く,ヒツジ,ヤギで中等度,ニホンカモシカでは重症となることが多い。本研究では,PPVがコードする血管内皮増殖因子(VEGF)の生物学的活性解析を行い,動物種差と病原性差の関係を明らかにする。本年度は,前年度の成果をもとにさらに発展,かつ詳細な解析を行い以下の成果を得た。アミノ酸配列が異なるVEGFをゲノム内に持つPPV3株をウシ,ヒツジ,ニホンカモシカの細胞に感染させ,VEGF mRNAの発現をRT-PCRにより経時的に比較した。アミノ酸配列の違いに関わらず,mRNA発現のタイミングは3株ともそれぞれの細胞で大きな差がないことを明らかにした。次に3種類のVEGFを組換え蛋白として大腸菌で発現させた。モルモットの皮内注射で,組換えVEGFの濃度に依存し血管の透過性が亢進した。しかし3種類のVEGF間では透過性亢進能に大きな差は認められなかった。またヒト臍帯静脈内皮細胞に対する増殖促進活性が3種類とも認められたが,その効果にも大きな差がなかった。ウシ,ヒツジ,ヤギ,ニホンカモシカの腹腔大動脈から無菌的に血管内皮細胞を分離,培養する方法の確立に成功した。ただし,わずかに混入する内皮細胞以外の細胞の除去が解決すべき課題として残っている。以上より,国内で分離したPPVがコードしているVEGFは,アミノ酸配列が異なるにも関わらず,同程度の生物学的活性を有していることを明らかにした。また、ウイルス由来VEGFがPPV感染症の病原性に関与していることが示唆された。さらに,動物種差による病原性の差は,ウイルス側の要因よりも,宿主側に起因する可能性が示唆された。

The PPV of the same species is sensitive, symptomatic, moderate, and severe. This study aims to elucidate the biological activity of vascular endothelial growth factor (VEGF) in PPV and to clarify the relationship between animal species and pathogenicity. This year, compared with the previous year's achievements, the following achievements have been achieved. The expression of VEGF mRNA was compared between the three PPV strains infected with different VEGF gene sequences by RT-PCR. The expression of mRNA was detected in three different cells. Next, three types of VEGF protein were found in Escherichia coli. Intradermal injection of VEGF increases the permeability of blood vessels depending on VEGF concentration. The three kinds of VEGF have different permeability. There are three kinds of proliferation promotion activities in umbilical vein endothelial cells. The method of isolation and culture of sterile vascular endothelial cells from abdominal aorta was successfully established. The problem of removing cells other than endothelial cells is solved. The above results show that VEGF is isolated from PPV in China, and its biological activity is similar to that of VEGF. The origin of VEGF is related to the pathogenicity of PPV infection. In addition, differences in pathogenicity among animal species indicate the possibility of causative factors on the host side and on the host side.