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細胞外小胞が内包する分子の動態解明と新しい牛伝染性リンパ腫モニタリング技術の開発

阐明细胞外囊泡中分子的动态并开发牛传染性淋巴瘤的新监测技术

基本信息

批准号：
22KF0161
负责人：
猪島康雄
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KF0161/
关键词：
細胞外小胞牛伝染性リンパ腫 BLV EBL モニタリング

项目摘要

牛伝染性リンパ腫（EBL）は、牛伝染性リンパ腫ウイルス（BLV）感染を原因とし、いまだ発症要因は解明されていない。毎年発症頭数が増加しており、大きな経済的損失をもたらしている。本研究では、牛の生乳と血液に含まれる細胞外小胞（EV）に着目した。EVは、あらゆる細胞から分泌され、宿主の生体環境を反映してEVが内包する分子の種類と量が変動することが知られており、ヒトではがん診断に活用されている。EBLは牛のB細胞性リンパ腫、血液のがんであることから、EV内の分子を網羅的に解析し、内包分子がリンパ腫発症までの過程でどのような動態を示すのか解明し、新しいEBLのモニタリング技術の確立を目指す。本年度は、以下の研究を進めた。①大学附属の酪農場、民間の酪農場、と畜場で、BLV感染牛、およびEBLと診断されたEBL発症牛から生乳と血液を収集した。同様にBLVに感染していない健康牛からも生乳と血液を収集した。②生乳と血液中のEVを分離・精製後、内包する核酸（mRNA、miRNA）を抽出し、マイクロアレイ、ジーンチップを用いて網羅的比較解析を実施した。その結果、以下の研究成果を得た。BLV感染量を定量し、感染初期、中期、後期に分類した。BLVに感染していない健康牛の生乳EV内包分子と比較し、感染後期牛の生乳EVで有意に増加するmiRNAを複数種類同定できた。また、それらのmiRNAを検出するためのリアルタイムPCR検出系の確立に一部成功した。さらにEBL発症牛の生乳EV内で有意に増加するmRNA、およびmiRNAを複数種類同定することができた。同様に、それらのmRNA、miRNAを検出するためのリアルタイムPCR検出系の確立に一部成功した。

The cause of infectious disease in cattle (EBL) and the cause of infectious disease in cattle (BLV) should be clarified. The number of cases per year has increased, and the losses of large enterprises have increased. In this study, the extracellular vesicles (EV) of bovine milk and blood were observed. EV is secreted by cells, reflected in the host's biological environment, and used in diagnosis because of changes in the amount and type of molecules contained in EV. EBL provides insight into the dynamics of B-cell sex, blood and molecular trapping in EV, and new EBL technology for establishing molecular trapping techniques. This year, the following research progress.① Dairy farms affiliated with universities, folk dairy farms, livestock farms, BLV infected cattle, EBL diagnosis, EBL development, raw milk and blood collection In the same way, BLV infection occurs in healthy cattle, milk and blood. (2) After isolation and purification of EV in raw milk, nucleic acid (mRNA, miRNA) in the envelope is extracted, and the comparative analysis of EV in the network is carried out. The following results were obtained. The quantity of BLV infection was quantified and classified into early, middle and late stages. The number of miRNAs in milk EV from infected cows was significantly higher than that from healthy cows. The miRNA detection system was partially successful. The expression of mRNA, miRNA and miRNA is intentionally increased in the milk of EBL patients. The PCR system was partially established successfully when the mRNA and miRNA were detected.