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Structural basis of activation of a novel tumor progression signaling involving Wnt signaling proteins and supression by antibodies.

涉及 Wnt 信号蛋白和抗体抑制的新型肿瘤进展信号激活的结构基础。

基本信息

批准号：
21H02420
负责人：
柴田直樹
金额：
$ 8.32万
依托单位：
University of Hyogo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

R4年度は，研究計画調書に記した４項目のうち主に以下の３項目，① CKAP4-DKK複合体の構造解析，② CKAP4細胞外領域全体の構造解析，③ CKAP4-抗体フラグメント複合体の構造解析について研究を遂行した。以下にこれまでの結果について概要を示す。① CKAP4とDKK cysteine rich domain (DKK_CRD1)試料をそれぞれ別々に調製したものを混合し結晶化スクリーニングキットを用いて結晶化条件の検討を行ったところ，１条件において結晶が得られた。② CKAP4細胞外領域（128-602）のうち，431-602の領域について新たに発現系を構築し，結晶を得ることができた。放射光施設において回折実験を行ったところ，約 4オングストローム分解能のデータを得ることに成功した。③ ４種類の抗CKAP4モノクローナル抗体のFabフラグメントとCKAP4細胞外領域との複合体を調製した。結晶化スクリーニングを行うために十分な量の複合体試料を得ることが困難であったため，結晶構造解析法よりも少量での構造解析が可能なクライオ電子顕微鏡による単粒子解析を目指して測定を行った。その結果，ほとんどの粒子がグリッド上で気液界面に集合していることが判明した。得られた画像データから単粒子解析を行ったが，明瞭な三次元再構成像を得ることが困難であった。二次元でのクラスタリングではCKAP4-Fab複合体と思われる像が得られたため，グリッド作成法の検討により明瞭な三次元再構成像を得ることは可能であると思われる。

In the R4 year, the following 3 projects are under the control of the Research Plan 4 project, ① Structural analysis of the CKAP4-DKK complex, ② Structural analysis of the entire extracellular domain of CKAP4, ③ Structural analysis of the CKAP4-antibody FRP complex was carried out. The following is a summary of the results of the にこれまでの. ① CKAP4とDKK cysteine rich domain (DKK_CRD1) Sample をそれぞれ々に Modulation したものを Mixed しCrystallization スクリーニングキットを Use the いて crystallization condition の検を行ったところ, and the 1 condition において crystallization がget られた. ② The extracellular domain of CKAP4 (128-602) is constructed, and the domain of 431-602 is constructed and crystallized. The radioactive light facility can be turned back and turned around, and the decomposition energy of about 4 degrees can be reduced successfully. ③ ４Types of anti-CKAP4 anti-CKAP4 antibodies are modulated by FabFab cells in the extracellular domain of CKAP4 complex. Crystallization of スクリーニングを行うために十なquantityのcomplex sampleをgetsることがdifficultyであったため, crystal structure solution Analytical method: It is possible to analyze the structure of a small amount of materials, and it is possible to analyze the structure of a small amount of materials using an electron microscope and to analyze the particles using a microscopic microscope. As a result, it is clear that the particles are gathered at the liquid interface. It's easy to understand how to analyze single particles and understand how difficult it is to reconstruct an image in three dimensions. Two-dimensional でのクラスタリングではCKAP4-Fab complex と思われる resembles が得られたため, The three-dimensional reconstructed image of グリッド法の検検によりclear is possible and it is possible.