β-カテニンの分解制御を行うAxin-Dvl複合体の構造解析

控制 β-catenin 降解的 Axin-Dvl 复合物的结构分析

• 批准号: 17770093
• 负责人: 柴田 直樹
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: University of Hyogo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17770093/
• 关键词: Axin; Wntシグナル; 立体構造; X線結晶構造解析; Dishevelled; 結晶化; X線結晶構造解析法

AxinとDishevelled(Dvl)はそれぞれ、体節形成、体軸形成、細胞の分化・分裂などを制御するWntシグナル伝達系の負、及び正の因子として機能している。これら2つのタンパク質は複合体を形成することが知られているが、X線結晶構造解析法による複合体の立体構造解析を目指して、複合体を形成する各タンパク質の発現系の改良と試料の調製、そしてその結晶化を主として行った。これまでDvl結合領域を含むMBP-Axin(508-832)については、発現量は十分であり、簡単な精製法で結晶化スクリーニングを行うに十分な量を確保できていたが、Axin結合領域を含むGST-Dvl(1-340)では発現量が少なかった。しかしながら、ホスト大腸菌の種類を検討し、レアコドンを含む遺伝子でも効率的に発現できるホストを用いたところ、結晶化スクリーニングを行うに十分な量を確保できるようになった。現在の所、これらの複合体については結晶が得られていない。また、AxinについてはDIXドメインを含むC末端付近め領域について、結晶化と立体構造解析に成功した。その結果DIXドメインの頭尾が結合するように会合し、らせん構造を構築していた。Axin-DIXドメインとホモロジーの高い同様のドメインを持つDvlでは細胞内で繊維状の構造を構築することが知られているが、このような会合様式によって繊維状の構造物が構築されることが示唆された。

Axin と Dishevelled (Dvl) は そ れ ぞ れ, somite forming, body axis の formation, cell differentiation, split な ど を suppression す る Wnt シ グ ナ ル 伝 is の negative, and び is の と し て function し て い る. こ れ ら 2 つ の タ ン パ ク qualitative は complex を form す る こ と が know ら れ て い る が, X-ray crystal structure analytic method に よ る complex の three-dimensional structure parsing を refers し て, complex を formation す る each タ ン パ ク qualitative の 発 modified と try now is の の modulation, そ し て そ の crystallization を main と し て line っ た. を こ れ ま で Dvl combination field containing む MBP - Axin (508-832) に つ い て は, 発 now は very で あ り, Jane 単 な refining process で crystallization ス ク リ ー ニ ン グ を line う に very な quantity を ensure で き て い た が, を Axin combining field containing む GST - Dvl (1-340) で は 発 now fewer が な か っ た. し か し な が ら, ホ ス ト coliform の kinds を beg し 検, レ ア コ ド ン を contain traces of む 伝 son で も sharper rate に 発 now で き る ホ ス ト を with い た と こ ろ, crystallization ス ク リ ー ニ ン グ を line う に very な quantity を ensure で き る よ う に な っ た. Now, the <s:1> complex に に れら <s:1> crystallized が to られて られて な な. ま た, Axin に つ い て は DIX ド メ イ ン を む C end paying nearly め field に つ い て, crystallization と three-dimensional structure parsing に successful し た. Youdaoplaceholder0 そ result DIXドメ ドメ ドメ <s:1> <s:1> the head and tail of the が combine するように meet <s:1> and らせん construct を build て て た た た. Axin - DIX ド メ イ ン と ホ モ ロ ジ ー の high い with others の ド メ イ ン を hold つ Dvl で は intracellular で 繊 d shape を の structure constructing す る こ と が know ら れ て い る が, こ の よ う な meet others type に よ っ て 繊 d shape の structure が build さ れ る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Crystallization and preliminary X-ray crystallographic studies of the axin DIX domain.

• DOI: 10.1107/s1744309107022579
• 发表时间: 2007-06
• 期刊: Acta crystallographica. Section F, Structural biology and crystallization communications
• 作者: N. Shibata;Y. Tomimoto;T. Hanamura;R. Yamamoto;M. Ueda;Y. Ueda;N. Mizuno;H. Ogata;H. Komori;Y. Shomura;M. Kataoka;S. Shimizu;J. Kondo;Hideki Yamamoto;A. Kikuchi;Y. Higuchi

The DIX domain of Dishevelled confers Wnt signaling by dynamic polymerization

• DOI: 10.1038/nsmb1247
• 发表时间: 2007-06-01
• 期刊: NATURE STRUCTURAL & MOLECULAR BIOLOGY
• 影响因子: 16.8
• 作者: Schwarz-Romond, Thomas;Fiedler, Marc;Bienz, Mariann
• 通讯作者: Bienz, Mariann