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リン脂質の非対称分布の分子機構と生理機能の解明

阐明磷脂不对称分布的分子机制和生理功能

基本信息

批准号：
21H02682
负责人：
瀬川勝盛
金额：
$ 11.15万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

フリッパーゼであるATP8A1とATP11BをATP11A-ATP11C二重欠損細胞の遺伝背景において欠損させ(四重欠損細胞)、定常状態で細胞膜のホスファチジルセリン(PS)が露出するかを確認した。その結果、既知のPSフリッパーゼをすべて失ったフリッパーゼ四重欠損細胞は、依然として細胞膜のPSの非対称分布を樹立することが明らかとなった。本年度では、この四重フリッパーゼ欠損細胞株を用いて、Genome-wide CRISPR/Cas9法を用いた機能スクリーニングを行った。具体的に、四重欠損細胞に、約21000の遺伝子を標的にしたCRISPR/Cas9 sgRNAライブラリーを組み込んだウイルスを感染させ、各種遺伝子を破壊する。次いで、定常状態においてPSの非対称性が崩壊し、PSを表面に露出した変異細胞をセルソーターで分取し、どの遺伝子が欠損しているかを明らかにした。四重フリッパーゼ欠損細胞を用いた上述のスクリーニングの結果、候補分子の同定(PS regulator: PSReg)に成功した。本年度は、PSRegの解析を中心に行なった。その結果、PSRegが小胞体に存在すること、複数の分子からなる複合体を形成していることを見出した。PSRegがどのように細胞膜PSの分布を制御するのかその分子機構をさらに明らかにしていくことを目指す。さらに、前年度に同定できたホスファチジルコリン制御分子(PC regulator: PCReg)の解析も行なった。その結果、PCRegが細胞膜に局在すること、PSRegのような複数の分子からなる複合体を形成していないことが見出された。

フリッパーゼであるATP8A1とATP11BをATP11A-ATP11C double defective cell backgroundにおいて无码させ(Quadruple defective cell), steady state でcell membrane のホスファチジルセリン(PS)が出するかをconfirmationした.そのRESULTS, KNOWN PSフリッパーゼをすべてlossったフリッパーゼQuadruple defective cellsは、It is still the same as the non-symmetrical distribution of PS in the cell membrane. This year, the use of cell lines and the function of the Genome-wide CRISPR/Cas9 method have been carried out. Specifically, quadruple defective cells, approximately 21,000 target cells, CRISPR/Cas9 sgRNA ライブラリーを组み込んだウイルスを infection させ, various leftovers を棊する. Second, steady state, PS, asymmetry, collapse, PS surface, exposed, PS Different cells をセルソーターで分takeし, どの伝子が无码しているかを明らかにした. The result of the quadruple FRP defective cells and the above-mentioned result and candidate molecule (PS regulator: PSReg) were successfully used. This year, the analysis center of PSReg is the same.その result, PSReg が cell body に existence すること, plural molecule からなる complex を formation していることを见出した. PSRegがどのようにPSのdistributionをcontrolするのかそのmolecules organizationをさらに明らかにしていくことを Eye finger.さらに、The previous year's に同定できたホスファチジルコリンcontroller (PC regulator: PCReg) analysis も行なった.その results, PCReg が cell membrane に bureau in すること, PSReg のような plural molecule からなる complex を formation していないことが见出された.

项目成果

期刊论文数量（14）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Physiology & Pathology of plasma membrane flippases

生理

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kohatsu S;Yamamoto D.;瀬川　勝盛
通讯作者：
瀬川　勝盛

Asymmetry & vulnerability of the plasma membrane

不对称

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tatsumi Manae;Kishi Takayuki;Ishida Satoru;Kawana Hiroki;Uwamizu Akiharu;Ono Yuki;Kawakami Kouki;Aoki Junken;Inoue Asuka;湯村　太一，竹本　佳司;瀬川　勝盛
通讯作者：
瀬川　勝盛

ホスファチジルセリンと死細胞の認識

磷脂酰丝氨酸和死细胞识别