新規脂質運搬体としての分泌膜小胞エクソソームとその生理・病態学的意義の解明

分泌膜囊泡外泌体作为新型脂质载体的阐明及其生理和病理意义

• 批准号: 11J05297
• 负责人: 瀬川 勝盛
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J05297/
• 关键词: エクソソーム; マクロファージ; フォスファチジルセリン

分泌膜小胞であるエクソソームが食細胞にどのように取り込まれるかを調べる為に、エクソソームの精製、精製エクソソームの蛍光物質標識を行った。培養脂肪細胞および未成熟樹上細胞の培養上清を、段階的に超遠心をかけることで分泌膜小胞エクソソームを単離した。単離した分泌膜小胞エクソソーム画分には、エクソソーム濃縮の指標となる、MFG-E8およびFlottilinが濃縮していることを確認した。エクソソームにはコレステロールが多く含まれている事が知られているが、我々の調整したエクソソーム内にも多くのコレステロールや中性脂肪が含まれている事も、薄膜クロマトグラフィー法にて確認した。次いで、単離したエクソソームを蛍光試薬PKH26にて蛍光標識した。蛍光ラベルしたエクソソームを各種細胞に添加し、細胞の蛍光値をフローサイトメトリーで測定することで、エクソソームの細胞内への取り込みを定量的に評価した。繊維芽細胞NIH3T3は通常状態では、フォスファチジルセリン受容体Tim4を全く発現しておらず、エクソソームを効率よく取り込むことができない。しかしながら、フォスファチジルセリン受容体であるTim4を過剰発現させることで、エクソソームを強く細胞内に取り込む事が明らかとなった。またこの増強したエクソソームの取り込みは、エクソソーム表面のフォスファチジルセリンをマスクすることで消失した。Tim4は腹腔常在性マクロファージに強く発現していることから、内因性のTim4がエクソソームの取り込みに関与しているかを調べた。その結果、Tim4欠損マウスの腹腔常在性マクロファージは、野生型のマクロファージに比し、エクソソームを効率よく取り込めないことが明らかとなった。

Secretory membrane vesicles are prepared for purification and purification of fluorescent substances. Cultured adipocytes and immature tree cells are isolated from culture supernatants and segments of cells in vitro. The concentration index of MFG-E8 and Flottilin was confirmed. In addition, we can adjust the quality of the products. In the middle of the day, the light test PKH26 was used to identify the light. The measurement of the concentration of light in various cells and the quantitative evaluation of the concentration of light in cells NIH 3T3 cells in normal state, the receptor Tim4 is fully developed, and the rate of recovery is low. The cell is a cell, and the cell is a cell, and the cell is a cell. This is the first time I've ever seen a person who's been in a bad mood. Tim4 is always in the middle of the sex, strong, and internal Tim4 is always in the middle of the sex. As a result, Tim4 lacks the ability to detect and detect the presence of the virus.

项目成果

Constitutive exposure of phosphatidylserine on viable cells

• DOI: 10.1073/pnas.1114799108
• 发表时间: 2011-11-29
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Segawa, Katsumori;Suzuki, Jun;Nagata, Shigekazu
• 通讯作者: Nagata, Shigekazu