Single cell analysis of TCR genotypes of CTL at recovery phase of acute Dengue infection

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具体的内容　デング熱は熱帯地域を中心に世界各地で感染者が増加する蚊媒介性のウイルス感染症である。ウイルスには４つの血清型が存在し、血清型の異なるウイルスには再感染することが知られており、その際にはより症状が重い重症型デング熱となる。重症化のメカニズムとしては、抗体依存性ウイルス感染増強現象が挙げられるが、それ以外にもサイトカインストームや細胞性免疫の異常などが疑われている。本研究では、急性期の患者の末梢血に現れるウイルス反応性の細胞障害性T細胞に焦点を絞り、感染の初期、回復期、安定期の３つのステージでの末梢血中のウイルス特異的なCD8陽性メモリーT細胞の動態をシングルセル解析法を用いて解析する。デング熱患者はフィリピンの熱帯医学研究所RITMの病院を受診した１２歳以上の小児を対象とし、３つの時期にそれぞれ２０ｃｃのヘパリン血採血を行い、末梢血単核球を分離し凍結保存する。これを長崎大学の熱研において、目的のＴ細胞分画に精製後シングルセルに分離し、mRNA発現解析を行い、Ｔ細胞レセプターおよび活性化マーカー遺伝子により、各時期の分画解析を行う。コロナの流行により、デング患者のリクルートは困難を極めたが、一年遅れで計画したサンプル数の凍結単核球を準備することができた。現在これらから染色体ＤＮＡを分離し、患者のＨＬＡクラス１のタイピングを行っている。意義と重要性　フィリピン人に多いＨＬＡ型を選択し、複数の共通するタイプを有する患者の発現分析により、デングに特有の反応性を発見することで、病態解析のためのＣＤ８Ｔ細胞分画やそのクローナリティーについての治験を集積し、重症化の防御に有効なＴ細胞反応の特徴を明らかにすることができると考えている。