Clinical application of patient-derived xenograft zebrafish model of bladder cancer for evaluating drug efficacy and discovering new seeds of treatment

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ゼブラフィッシュへの移植部位は卵黄嚢、duct of Cuiver、pericardiac space、perivitelline spaceがあるが、どの部位に移植するのが癌細胞の薬剤反応性を評価するのに最適かどうかの一定の見解がさだまっていない。これまでの我々の研究の結果、一般的によく使用されている卵黄嚢は細胞増殖のための空間が狭く、透明性の点で蛍光色素による細胞数評価には適していないことが分かった。血流・細胞増殖のための空間スペース・画像撮影のために必要な透明性や細胞分布からduct of Cuiverが最適であった。DsRedを安定発現する膀胱癌細胞株UMUC3DsRedを樹立し、CytoTellTM UltraGreenとの２重染色による評価で、CytoTellTM UltraGreenの細胞数評価法の妥当性を検討した。その結果、CytoTellTM UltraGreenの蛍光発色法による細胞数評価は、膀胱癌培養細胞株の細胞数実測値とin vitroでもin vivo（ゼブラフィッシュ内)でも良い相関をすることがわかった。また、UMUC3およびT24の親株（CDDP感受性株）とそれらのCDDP耐性株をin vitroで樹立し、それぞれゼブラフィッシュを用いた薬効評価系でin vitroと同様な感受性が示せた。ヒト膀胱癌組織マウス異種移植モデル(mPDX)２系統を樹立し、それぞれCDDP感受性と非感受性株であることがin vivoで評価できた。その２つの癌細胞をゼブラフィッシュに移植してCDDPの効果判定をしたところ、mPDXと同様の反応性を示した。以上から、ゼブラフィッシュを宿主としたヒト膀胱癌異種移植モデルは短期に薬効評価可能で、mPDXに勝るとも劣らない評価系であることが実証された。