LAP依存性組織リモデリングによる歯周組織再生医療の新機軸

利用LAP依赖性组织重塑在牙周组织再生医学中取得新突破

基本信息

批准号：
21H03118
负责人：
竹立匡秀
金额：
$ 11.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H03118/
关键词：
歯周組織再生脂肪組織由来多系統前駆細胞 efferocytosis LAP

项目摘要

本研究課題では、アポトーシス細胞貪食機能であるefferocytosisとLAPという組織恒常性維持機構を「能動的再生誘導因子」として捉えることで、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ADMPC）移植による組織再生過程の分子メカニズムを組織リモデリングの観点から解明することを目的として研究を遂行している。令和4年度は、令和3年度に確立したラット歯周組織欠損に対する同種ADMPC移植モデルを用いた組織学的解析から歯周組織局所において移植ADMPCをefferocytosisする細胞の同定を試みた。結果、ADMPC周囲にマクロファージの集積が観察されたものの、実行細胞同定には研究手法に限界があることが明らかとなった。そこで計画の一部を変更し、令和3年度に実施した結果から、歯周組織に移植した同種ADMPCは移植後2週間程度でアポトーシスすることが示唆されたため、移植細胞のアポトーシスが組織再生に及ぼす影響を検討するためにアポトーシス抵抗性ADMPCを作製した。すなわち、アポトーシス抵抗性分子であるBcl-2を、レンチウイルスを用いてGFPラット由来ADMPCに遺伝子導入後、薬剤耐性によるセレクションによりstable発現細胞を作製した。その後、Bcl-2の発現量を確認後、caspase発現を指標として機能をin vitroにて検証した。一方で、ラット骨髄からマクロファージを誘導し、アポトーシスを誘導したADMPCと共培養することによりin vitroにおけるefferocytosisをタイムラプス解析した。結果、共培養24時間後から48時間後に活発なefferocytosisが観察された。さらにADMPCをefferocytosisしたマクロファージの細胞特性を解析するために、共培養後の表面抗原の発現変化をFACSにて明らかにした。

该研究主题旨在通过移植脂肪组织衍生的多线祖细胞（ADMPC）来阐明组织再生的分子机制，从组织重塑的角度查看组织稳态维持机制，这些机制是维持组织的机制，这些机制是肥大的细胞吞噬细胞吞噬作用和lap signuces stripers ins stuction and lap ins ins of like indecores ins in struce indeceres incorisers。在2022年，我们试图通过使用组织学分析使用组织学分析来鉴定细胞在2021年建立的大鼠牙周组织缺陷中使用组织学分析对局部牙周组织的胞毒性，尽管在AMDPC周围发现了巨噬细胞的积累，但该研究表现出了限制了该方法的研究。因此，某些计划发生了改变，2021年实施结果表明，植入牙周组织中植入的同种异体ADMPC将在植入后大约两周内凋亡，因此产生了耐凋亡的ADMPC来检查移植细胞对移植细胞对组织再生的影响。也就是说，将抗凋亡的分子BCl-2转染到使用慢病毒衍生自GFP大鼠的ADMPC之后，通过基于耐药性的选择来制备稳定的表达细胞。之后，确认了Bcl-2的表达水平，并使用caspase表达作为指数在体外验证该函数。另一方面，巨噬细胞是由大鼠骨髓诱导的，并与诱导凋亡的ADMPC共同培养，并且体外肿瘤病是延时分析。结果，共培养后24至48小时观察到主动肿瘤病。此外，为了分析与ADMPC外吞作用的巨噬细胞的细胞特性，FACS揭示了共培养后表面抗原表达的变化。

项目成果

期刊论文数量（1）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Carbonate apatite as a scaffold for periodontal regeneration cell therapy

碳酸盐磷灰石作为牙周再生细胞治疗的支架

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kawasaki K; Takedachi M; Sawada K; Morimoto C; Hirai A; Shimomura J; Murata M; Kawakami K; Miki K; Takeshita N; Sakura K; Matsuyama A; Okura H; Kitamura M; Murakami S
通讯作者：
Murakami S