LAP依存性組織リモデリングによる歯周組織再生医療の新機軸

利用LAP依赖性组织重塑在牙周组织再生医学中取得新突破

• 批准号: 21H03118
• 负责人: 竹立 匡秀
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H03118/
• 关键词: 歯周組織再生; 脂肪組織由来多系統前駆細胞; efferocytosis; LAP

本研究課題では、アポトーシス細胞貪食機能であるefferocytosisとLAPという組織恒常性維持機構を「能動的再生誘導因子」として捉えることで、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ADMPC）移植による組織再生過程の分子メカニズムを組織リモデリングの観点から解明することを目的として研究を遂行している。令和4年度は、令和3年度に確立したラット歯周組織欠損に対する同種ADMPC移植モデルを用いた組織学的解析から歯周組織局所において移植ADMPCをefferocytosisする細胞の同定を試みた。結果、ADMPC周囲にマクロファージの集積が観察されたものの、実行細胞同定には研究手法に限界があることが明らかとなった。そこで計画の一部を変更し、令和3年度に実施した結果から、歯周組織に移植した同種ADMPCは移植後2週間程度でアポトーシスすることが示唆されたため、移植細胞のアポトーシスが組織再生に及ぼす影響を検討するためにアポトーシス抵抗性ADMPCを作製した。すなわち、アポトーシス抵抗性分子であるBcl-2を、レンチウイルスを用いてGFPラット由来ADMPCに遺伝子導入後、薬剤耐性によるセレクションによりstable発現細胞を作製した。その後、Bcl-2の発現量を確認後、caspase発現を指標として機能をin vitroにて検証した。一方で、ラット骨髄からマクロファージを誘導し、アポトーシスを誘導したADMPCと共培養することによりin vitroにおけるefferocytosisをタイムラプス解析した。結果、共培養24時間後から48時間後に活発なefferocytosisが観察された。さらにADMPCをefferocytosisしたマクロファージの細胞特性を解析するために、共培養後の表面抗原の発現変化をFACSにて明らかにした。

This study aims to investigate the mechanism for maintaining tissue homeostasis as an "active regeneration inducer" in the process of tissue regeneration following subcutaneous adipose derived multisystem progenitor cell (ADMPC) transplantation. In 2004 and 2003, we established the identification of cells with ADMPC-induced efferocytosis in the tissue of the same species. The results showed that the concentration of DMPC was higher than that of the control group. Part of the program was conducted in 2003 and 2004. Results showed that allogeneic ADMPC transplantation was successful within 2 weeks after transplantation, and the effects of transplantation on tissue regeneration and resistance of ADMPC were discussed. The expression of Bcl-2, Bcl-2 and Bcl-2 in the resistant cells was induced by the expression of Bcl-2, Bcl-2 and Bcl-2 in the resistant cells. After Bcl-2 expression is confirmed, caspase expression indicators and functions are identified in vitro. A method for the analysis of effeciency in vitro culture of ADMPC is described. As a result, after a total of 24 hours of incubation and 48 hours of incubation, the active efferocytosis was observed. The expression of surface antigens after co-culture was analyzed by FACS.

项目成果

Carbonate apatite as a scaffold for periodontal regeneration cell therapy

碳酸盐磷灰石作为牙​​周再生细胞治疗的支架

• 发表时间: 2022
• 作者: Kawasaki K; Takedachi M; Sawada K; Morimoto C; Hirai A; Shimomura J; Murata M; Kawakami K; Miki K; Takeshita N; Sakura K; Matsuyama A; Okura H; Kitamura M; Murakami S
• 通讯作者: Murakami S