LAP依存性組織リモデリングによる歯周組織再生医療の新機軸

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本研究課題では、アポトーシス細胞貪食機能であるefferocytosisとLAPという組織恒常性維持機構を「能動的再生誘導因子」として捉えることで、脂肪組織由来多系統前駆細胞（ADMPC）移植による組織再生過程の分子メカニズムを組織リモデリングの観点から解明することを目的として研究を遂行している。令和4年度は、令和3年度に確立したラット歯周組織欠損に対する同種ADMPC移植モデルを用いた組織学的解析から歯周組織局所において移植ADMPCをefferocytosisする細胞の同定を試みた。結果、ADMPC周囲にマクロファージの集積が観察されたものの、実行細胞同定には研究手法に限界があることが明らかとなった。そこで計画の一部を変更し、令和3年度に実施した結果から、歯周組織に移植した同種ADMPCは移植後2週間程度でアポトーシスすることが示唆されたため、移植細胞のアポトーシスが組織再生に及ぼす影響を検討するためにアポトーシス抵抗性ADMPCを作製した。すなわち、アポトーシス抵抗性分子であるBcl-2を、レンチウイルスを用いてGFPラット由来ADMPCに遺伝子導入後、薬剤耐性によるセレクションによりstable発現細胞を作製した。その後、Bcl-2の発現量を確認後、caspase発現を指標として機能をin vitroにて検証した。一方で、ラット骨髄からマクロファージを誘導し、アポトーシスを誘導したADMPCと共培養することによりin vitroにおけるefferocytosisをタイムラプス解析した。結果、共培養24時間後から48時間後に活発なefferocytosisが観察された。さらにADMPCをefferocytosisしたマクロファージの細胞特性を解析するために、共培養後の表面抗原の発現変化をFACSにて明らかにした。