プリンヌクレオシドによる新規歯槽骨代謝制御機構のin vivo解析

嘌呤核苷新型牙槽骨代谢控制机制的体内分析

基本信息

批准号：
20791611
负责人：
竹立匡秀
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20791611/
关键词：
骨代謝アデノシン CD73 ノックアウトマウス骨芽細胞

项目摘要

本研究課題では、プリンヌクレオシドの一つであるアデノシン、(Ado)に着目し、骨代謝制御機構における役割について解析をすすめている。平成20年度の研究成果について下記に報告する。まず、骨芽細胞分化過程におけるAdoの濃度調節因子およびアデノシンレセプター(AdoR)の発現を解析した。マウス前骨芽細胞株MC3T3-E1、を石灰化誘導培地にて培養し、経時的にRNAを採取、Ado産生酵素であるCD73、Ado代謝に関与するアデノシンデアミナーゼ(ADA)及びアデノシンキナーゼ(AK)の両酵素、さらにはAdoRの遺伝子発現を解析した。その結果、CD73、A2aおよびA2bサブタイプAdoRは分化に伴い発現が上昇することが明らかとなった。一方で、ADAならびにAKは分化誘導初期に発現上昇を認めたが、後期にかけて抑制された。これらの結果は骨芽細胞分化誘導に伴い、内因性Adoのシグナルが増強されている可能性を示唆している。さらに内因性Ado産生に関与するCD73分子のin vivoにおける骨代謝への関与を明らかにするために、CD73ノックアウトマウス(以下CD73KO)の骨組織における表現型を解析した。まず、CD73KO及び野生型コントロールマウスから大腿骨、脛骨を採取し、μCT及びpQCTを用いて骨量の解析を行なった。その結果、CD73KOは野生型マウスに比べ、海綿骨、皮質骨において骨量が減少していることが明らかとなった。さらに頭蓋骨からRNAを採取し、骨芽細胞分化マーカーである骨シアロタンパク、オステオポンチン、オステオカルシンの遺伝子発現を解析したところ、CD73KO由来頭蓋骨では野生型に比べ、これら遺伝子発現が有意に低下していることが明らかとなった。以上の結果からCD73分子によって産生された内因性Adoが骨形成において重要な役割を担っていることが示唆された。

该研究主题侧重于腺苷，腺苷是嘌呤核苷（ADO）之一，并正在促进其在骨代谢调节机制中的作用分析。 2008财政年度研究结果如下报道。首先，分析了成骨细胞分化过程中ADO浓度调节剂和腺苷受体（ADOR）的表达。在钙化诱导培养基中培养了小鼠前细胞系MC3T3-E1，并随着时间的推移收集RNA，并且CD73的基因表达是一种腺苷脱氨酶（ADA）（ADA）和腺苷激酶（AK）酶（AK）烯酶（AK）enzymes涉及Ado Ado ando and and and and and and and and and and ado。结果，揭示了CD73，A2A和A2B亚型Ador的表达随分化而增加。另一方面，ADA和AK在分化的早期阶段增加，但后来被抑制。这些结果表明，通过诱导成骨细胞分化，内源性ADO的信号可能会增强。此外，为了阐明体内骨代谢中涉及内源性ADO产生的CD73分子的参与，我们分析了CD73基因敲除小鼠骨组织的表型（以下称为CD73KO）。首先，从CD73KO和野生型对照小鼠中收集股骨和胫骨，并使用μCT和PQCT分析骨骼质量。结果，可以发现与野生型小鼠相比，取消骨和皮质骨的CD73KO的骨骼质量减少了。此外，从头骨中收集了RNA，并分析了核蛋白，骨桥蛋白和骨钙素的基因表达，它们是成骨细胞分化的标志物，表明与野生型相比，这些基因表达显着降低了CD73KO的颅骨。以上结果表明，由CD73分子产生的内源性ADO在骨形成中起重要作用。