表流水からの簡便・迅速な薬剤耐性病原大腸菌の超高効率濃縮回収とゲノム履歴分析

溶血性出血大腸菌（STEC）は，食中毒の発症事例が最も多く，しかも発症すると重篤な症状を引き起こすことがあるため，最も重要な病原大腸菌に位置づけられている．しかしながら，河川水の大腸菌の濃度は，ふん便や下水，生活排水と比較して低い。さらに不規則的かつ低存在率で発現するSTECの検出・計数は，通常の方法では極めて困難であるとされる．したがって，今日においても，河川水中のSTECの実態に関する知見・情報は極めて少ない．そこで本研究では，大淀川の最上流域から上流に至る流域において，新基準の大腸菌について公定法に準じてモニタリングを行った．また， 河川に極低濃度で存在すると推察されるSTECについては，凝集・泡沫濃縮法と酵素基質培地を組み合わせた手法を用いて回収し，病原遺伝子とO血清群遺伝子の解析によってSTECを判定した．2か月ごとに大淀川上流域10地点における大腸菌数の変動を調査した．また凝集・泡沫濃縮法によるSTECの回収を試みた．大腸菌数を各地点で計数したところ，生活環境項目環境基準を超過する地点が見られた．また，STECの存在が確認された．STEC陽性大腸菌株をMultiplex PCR法によって，遺伝子解析したところ，stx2 のみを保有するSTECが調査地点のSt．1から1株，St．5から3株検出された．人為的な汚染がほとんどないSt．1から検出されたSTECは，野生動物由来である可能性が高い．St．5におけるSTECは，St．4からSTECの検出がなかったこともあり，由来は不明である．しかしながら保有するSTEC関連遺伝子が同じであるため，St．1の由来と同一である可能性がある．本研究でSTECが検出されたことは，非常に深刻な事態であり，大腸菌の汚染源を解明し，対策を講じることが急務である．今後は，STEC株の薬剤耐性試験を実施する。

溶血性出血大腸菌（STEC）は，食中毒の発症事例が最も多く，しかも発症すると重篤な症状を引き起こすことがあるため，最も重要な病原大腸菌に位置づけられている．しかしながら，河川水の大腸菌の濃度は，ふん便や下水，生活排水と比較して低い。さらに不規則的かつ低存在率で発現するSTECの検出・計数は，通常の方法では極めて困難であるとされる．したがって，今日においても，河川水中のSTECの実態に関する知見・情報は極めて少ない．そこで本研究では，大淀川の最上流域から上流に至る流域において，新基準の大腸菌について公定法に準じてモニタリングを行った．また， 河川に極低濃度で存在すると推察されるSTECについては，凝集・泡沫濃縮法と酵素基質培地を組み合わせた手法を用いて回収し，病原遺伝子とO血清群遺伝子の解析によってSTECを判定した．2か月ごとに大淀川上流域10地点における大腸菌数の変動を調査した．また凝集・泡沫濃縮法によるSTECの回収を試みた．大腸菌数を各地点で計数したところ，生活環境項目環境基準を超過する地点が見られた．また，STECの存在が確認された．STEC陽性大腸菌株をMultiplex PCR法によって，遺伝子解析したところ，stx2 のみを保有するSTECが調査地点のSt．1から1株，St．5から3株検出された．人為的な汚染がほとんどないSt．1から検出されたSTECは，野生動物由来である可能性が高い．St．5におけるSTECは，St．4からSTECの検出がなかったこともあり，由来は不明である．しかしながら保有するSTEC関連遺伝子が同じであるため，St．1の由来と同一である可能性がある．本研究でSTECが検出されたことは，非常に深刻な事態であり，大腸菌の汚染源を解明し，対策を講じることが急務である．今後は，STEC株の薬剤耐性試験を実施する。