Development of new in vitro phenotypic assay to detect the artemisinin resistant Plasmodium falciparum

开发新的体外表型测定法来检测青蒿素耐药性恶性疟原虫

• 批准号: 19K16631
• 负责人: 池田 美恵
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K16631/
• 关键词: アルテミシニン耐性; マラリア原虫; Pyknotic form; RSA; 原虫密度; ヘマトクリット; アルテミシニン; in vitro 検査法; ELISA; pyknotic form; Pyknotic; 熱帯熱マラリア原虫; 薬剤耐性; in vitro 解析; pyknotic

本研究は、マラリア第一選択薬アルテミシニンへの耐性原虫検出法であるring-stage survival assay (RSA)法の解析方法を改良し、より簡便なin vitro耐性検査法を開発することを目的としている。本研究開始時、RSAではアルテミシニンによって出現するpyknotic formと耐性の関連を疑っていた。これまでの解析によって、アルテミシニン耐性の有無とpyknotic formの出現頻度には相関がみられないこと、実験室での培養条件次第でpyknotic formの頻度が変わることが明らかになってきた。さらにウガンダにおいて実施したRSAの改良法であるqRSAを用いたアルテミシニン疫学調査の結果からも、サンプルのpyknotic form出現頻度は2014年頃とは変わらず、2022年サンプルのアルテミシニン耐性と感受性原虫間での頻度も大きな差は見られなかった。pyknotic formの出現頻度と耐性との関連は薄いと考えられ、pyknotic formの頻度を基に耐性の有無を判定することは困難であると結論付けた。今年度新たに得た知見として、培養原虫を用いたpyknotic　formの出現条件が分かってきた。標準株である3D7を用い、5% ソルビトール溶液での同調培養を2回繰り返し、そこから96時間経過でほぼすべての原虫をpyknotic formにすることに成功した。原虫が同調していること、原虫密度が高いことが影響していると考えられる。また、前者に比べるとさらなる検討が必要ではあるが培養条件でのヘマトクリットを上昇させることもpyknotic form形成に貢献している可能性が高い。これまで安定的にpyknotic formを得ることは難しかったが、上記の培養法を用いることで安定的な解析可能となる。

这项研究旨在改善环阶段生存测定法（RSA）的分析方法，这是一种检测对疟疾一线药物青蒿素耐药性的方法，并开发了更方便的体外耐药性测试。在这项研究的开始时，RSA怀疑青蒿素和耐药表现出的杂酸形式之间的关联。先前的分析表明，在没有青蒿素的耐药性和发生杂种形式发生频率的存在或不存在之间没有相关性，而在实验室的培养条件下，杂酸形式的发生频率变化。此外，在乌干达进行的一种改进的RSA方法QRSA的血动氨基蛋白流行病学调查的结果表明，样品中出现的杂酸形式的频率与2014年左右相同，并且在20222样品中，青蒿素耐药性和易感原生动物的频率没有显着差异。据认为，杂氯形式的发生频率与耐药性之间的关联很小，得出的结论是，很难根据杂种形式的频率确定是否存在抗性。今年获得的新发现包括使用培养的原生动物出现杂种形式的条件。使用标准应变3D7，我们在5％山梨糖溶液中重复了同步培养物，两次，此后，几乎所有原生动物都成功地转化为碳酸盐。人们认为原生动物是同步的，而原生动物的高密度正在影响它。此外，尽管与前者相比需要进一步研究，但在培养条件下升高血细胞比容的可能也有助于形成杂酸形式。到目前为止，很难稳定地获得一种膨化形式，但是使用上述培养方法可以进行稳定的分析。

项目成果

Efficacy of piperaquine drug in Gulu Northern Uganda

哌喹药物在乌干达北部古卢的疗效

• 发表时间: 2023
• 作者: Betty Balikagala,Naoko Yoshida;Mie Ikeda;Naoyuki Fukuda;Makoto Hirai;Denis AAnywar;Osbert T Katuro;Gerald Odong;Eisaku Kimura;Nirianne M Q Paracpac;Martin Ogwang;Emmanuel I Odongo-Aginya;Toshihiro Horii;Toshihiro Mita.
• 通讯作者: Toshihiro Mita.

St Mary's Hospital Lacor/Gulu University(ウガンダ)

拉科尔圣玛丽医院/古鲁大学（乌干达）

Gulu University/St Mary's Hospital Lacor(ウガンダ)

古鲁大学/拉科尔圣玛丽医院（乌干达）

ウガンダ北部における熱帯熱マラリア原虫アルテミシニン感受性調査

乌干达北部恶性疟原虫青蒿素敏感性调查

• 发表时间: 2022
• 作者: 池田 美恵;吉田 菜穂子;Betty Balikagala;平井 誠;福田 直到;Osbert Katuro;Dennis Anywar;Nirianne Palacpac;Emmanuel Aginya;木村英作;堀井俊宏;美田敏宏
• 通讯作者: 美田敏宏

Isolation of Mutants With Reduced Susceptibility to Piperaquine From a Mutator of the Rodent Malaria Parasite Plasmodium berghei.

• DOI: 10.3389/fcimb.2021.672691
• 发表时间: 2021
• 期刊: Frontiers in cellular and infection microbiology
• 影响因子: 5.7
• 作者: Ikeda M;Hirai M;Tachibana SI;Mori T;Mita T
• 通讯作者: Mita T