Development of new in vitro phenotypic assay to detect the artemisinin resistant Plasmodium falciparum

开发新的体外表型测定法来检测青蒿素耐药性恶性疟原虫

• 批准号: 19K16631
• 负责人: 池田 美恵
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K16631/
• 关键词: アルテミシニン耐性; マラリア原虫; Pyknotic form; RSA; 原虫密度; ヘマトクリット; アルテミシニン; in vitro 検査法; ELISA; pyknotic form; Pyknotic; 熱帯熱マラリア原虫; 薬剤耐性; in vitro 解析; pyknotic

本研究は、マラリア第一選択薬アルテミシニンへの耐性原虫検出法であるring-stage survival assay (RSA)法の解析方法を改良し、より簡便なin vitro耐性検査法を開発することを目的としている。本研究開始時、RSAではアルテミシニンによって出現するpyknotic formと耐性の関連を疑っていた。これまでの解析によって、アルテミシニン耐性の有無とpyknotic formの出現頻度には相関がみられないこと、実験室での培養条件次第でpyknotic formの頻度が変わることが明らかになってきた。さらにウガンダにおいて実施したRSAの改良法であるqRSAを用いたアルテミシニン疫学調査の結果からも、サンプルのpyknotic form出現頻度は2014年頃とは変わらず、2022年サンプルのアルテミシニン耐性と感受性原虫間での頻度も大きな差は見られなかった。pyknotic formの出現頻度と耐性との関連は薄いと考えられ、pyknotic formの頻度を基に耐性の有無を判定することは困難であると結論付けた。今年度新たに得た知見として、培養原虫を用いたpyknotic　formの出現条件が分かってきた。標準株である3D7を用い、5% ソルビトール溶液での同調培養を2回繰り返し、そこから96時間経過でほぼすべての原虫をpyknotic formにすることに成功した。原虫が同調していること、原虫密度が高いことが影響していると考えられる。また、前者に比べるとさらなる検討が必要ではあるが培養条件でのヘマトクリットを上昇させることもpyknotic form形成に貢献している可能性が高い。これまで安定的にpyknotic formを得ることは難しかったが、上記の培養法を用いることで安定的な解析可能となる。

In this study, the first choice of this study was the improvement of the analysis method of the ring-stage survival assay (RSA) method and the simplicity of the resistance protozoa test method. The in vitro endurance test method is open to the public. At the beginning of this study, the RSA was in a pyknotic form and the patient's tolerance was related to the disease.これまでのanalyticsによって、アルテミシニンpatienceの有无とpyknotic formのappearance frequencyにはrelatedがみられないこと,実験 Roomでのcultivation condition orderでpyknotic formのfrequencyが変わることが明らかになってきた.さらにウガンダにおいて実士したRSAの Improvement methodであるqRSAを用いたアルテミシニン Epidemiological Survey Results からも、サンプルのpyknotic The frequency of appearance of form is as follows The frequency of tolerance and susceptibility to protozoa in ルテミシニン is the same as the difference between the resistance and susceptibility of the protozoa. pyknotic form's appearance frequency and endurance are related and thin. This year's new knowledge and knowledge, and the conditions for the emergence of protozoa in the pyknotic form are divided into two parts. Standard strain である3D7 い、5%ソルビトール solution でのsynchronous culture を2 times 粲り回し, そこから96 time 経pass でほぼすべてのprotozoa をpyknotic formにすることにsuccessした. The protozoa are synchronized and the protozoa density is high and the protozoa density is affected by the high density.また、The former is better than べるとさらなる検検がNecessary ではあるがCultivation conditions でのヘマトクリットをrise させることもpyknotic The possibility of contributing to form formation is high.これまで stable にpyknotic form をget ることはdifficult しかったが, the above-mentioned cultivation method を use いることで stable なanalysis possible となる.

项目成果

Efficacy of piperaquine drug in Gulu Northern Uganda

哌喹药物在乌干达北部古卢的疗效

• 发表时间: 2023
• 作者: Betty Balikagala,Naoko Yoshida;Mie Ikeda;Naoyuki Fukuda;Makoto Hirai;Denis AAnywar;Osbert T Katuro;Gerald Odong;Eisaku Kimura;Nirianne M Q Paracpac;Martin Ogwang;Emmanuel I Odongo-Aginya;Toshihiro Horii;Toshihiro Mita.
• 通讯作者: Toshihiro Mita.

St Mary's Hospital Lacor/Gulu University(ウガンダ)

拉科尔圣玛丽医院/古鲁大学（乌干达）

ウガンダ北部における熱帯熱マラリア原虫アルテミシニン感受性調査

乌干达北部恶性疟原虫青蒿素敏感性调查

• 发表时间: 2022
• 作者: 池田 美恵;吉田 菜穂子;Betty Balikagala;平井 誠;福田 直到;Osbert Katuro;Dennis Anywar;Nirianne Palacpac;Emmanuel Aginya;木村英作;堀井俊宏;美田敏宏
• 通讯作者: 美田敏宏

Gulu University/St Mary's Hospital Lacor(ウガンダ)

古鲁大学/拉科尔圣玛丽医院（乌干达）

Isolation of Mutants With Reduced Susceptibility to Piperaquine From a Mutator of the Rodent Malaria Parasite Plasmodium berghei.

• DOI: 10.3389/fcimb.2021.672691
• 发表时间: 2021
• 期刊: Frontiers in cellular and infection microbiology
• 影响因子: 5.7
• 作者: Ikeda M;Hirai M;Tachibana SI;Mori T;Mita T
• 通讯作者: Mita T