in vitro表現系解析を基にしたマラリア原虫アルテミシニン耐性機構の解明

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本年度は、主に現地から持ち帰った原虫凍結ストックからの耐性原虫株の確立、現地において定量RSA (qRSA)を用いた調査を実施した。凍結原虫ストックは、2018年ウガンダ採取サンプルを対象としアルテミシニン耐性原因責任遺伝子であるKech13の野生型、耐性であるA675V型、現在現地でマジョリティとなっているC469Y型、それぞれの培養を実施、最終的に野生型、変異型それぞれの培養クローン株化に成功した。耐性株のクローン化過程において、必ずしも得られるクローンは集団内のマジョリティではないという新たな知見を得た。変異型原虫において、現地サンプルでのKelch13遺伝子型は純粋な変異型であり、培養株化過程においても野生型の混入は一切見られなかったが、クローン化後得られた株の遺伝子型は5クローン中4クローンが野生型であり変異型は1クローンのみであった。おそらくシークエンス上ではほとんど検出されないKelch13野生型原虫がlimiting dilutionでのクローン化によって顕在化したと考えられる。ウガンダでの疫学調査は、既にART耐性が出現しているウガンダ北部における集団レベルでのアルテミシニン耐性の変化を明らかにするため実施した。qRSAを用いた調査によって104サンプルを得た。増殖不良や薬剤時間のミスなどがあったサンプルは除外し、67サンプルのデータを、in vivoアルテミシニン耐性出現以前である2014年-2015年のデータと比較した。その結果、耐性出現以前と出現後では集団全体のART耐性レベルは変化していないことが明らかになった。また、新たに現地において耐性型のマジョリティが初期に出現したA675V型からC469Y型に変化しているが、RSAレベルの耐性はC469Y型は野生型と変わらないという興味深い結果を得た。