权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

Development of DMD infiltrating Treg-Based Genome Editing Delivery Device

DMD 渗透性 Treg 基因组编辑传递装置的开发

基本信息

批准号：
19K17327
负责人：
岩渕久美子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Jichi Medical University (2020-2021)Kyoto University (2019)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はTregを細胞送達媒体としてゲノム編集酵素をコードしたAAVを筋損傷部位で直接生産させ、変異ジストロフィン遺伝子をエキソンスキッピングにより修復することを最終目的としている。まずT細胞を筋損傷部位に集積させるメカニズムの一つとして特異的TCRの発現の同定を試みた。マウス下肢筋損傷部位に集積するT細胞群を回収し、RNA-seqによるTCRレパトア解析を行ったところ、特定のTCRα配列を持つT細胞が偏在していることがわかった。一方でTCRβには偏りが見られなかった。次に、この特定TCR群をEF1αプロモーター下に2Aペプチド配列を挟んで組み込み、デュアル発現ベクターを作成した。次に、導入するTregまたはT細胞群素材を得る手段を検討した。生体から回収する方法の代替として、マウスES細胞からの誘導系を改良して用いた。OP9-DL1細胞共培養にFlt3lおよびIL7を添加する従来の誘導法に、ES細胞側へのFoxP3またはBcl-xLの過剰発現を併用した。これらにより、誘導後20日でCD4およびCD8両陽性の細胞集団をより効率よく得ることができ、移植に必要な量のT細胞送達媒体の確保が可能となった。これらの知見によりT細胞を送達媒体として用いる基盤が得られ、今後はAAVを搭載した状態で改変T細胞群のマウス組織内における集積・増殖能の機能評価を進めていく。また、AAVにCas9およびgRNA発現配列をコードしたものを用いて標的組織での局所的ゲノム編集の評価も行っていく。

This study focuses on the direct production of Treg cells delivered to the injured area of the tendon by editing the enzyme enzyme AAVさせ、変义ジストロフィン伝子をエキソンスキッピングによりRepair することをFinal purposeとしている.まずT cells are accumulated in the tendon injury site and the specific TCR is present and determined. Collection and recovery of T cell clusters at the injured site of lower limb tendons, RNA-seq TCR detection The specific TCRα alignment and the T cell bias are analyzed and analyzed. One party's TCRβには partial りが见られなかった. Second, the specific TCR group EF1α プロモーター下に2A ペプThe チドmatching arrangement is the を抟んでgroup み込み, and the デュアル発前ベクターを is made した. The next step is to import Treg and T cell group materials using the same method. The biorecovery method is used instead of the ES cell induction system and the ES cell induction system is improved. OP9-DL1 cells were co-cultured using the induction method of Flt3l and IL7, and the combination of FoxP3 and Bcl-xL on the ES cell side.これらにより、CD4 およびCD8両positive cell collection efficiency 20 days after induction It is possible to ensure that the necessary amount of T cells are delivered to the media for transplantation.これらの知见によりりT cell delivery media として Use the いるbase plate がget られ, and the future はAAVをThe status and function of the modified T cell group in the tissue and their ability to accumulate and proliferate are evaluated.また, AAV Cas9 およびgRNA 発 is now listed in をコードしたものを and is compiled by ゲノム of the organization bureau of いて standard.