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自己免疫疾患におけるMEFV遺伝子変異の病態修飾に関する研究

MEFV基因突变在自身免疫性疾病中的病理修饰研究

基本信息

批准号：
19K17888
负责人：
遠藤友志郎
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

CRISPER-Cas9を用いて遺伝設計を行い、全身性エリテマトーデス(SLE)のモデルマウスとして知られるMRL/lprマウスへのMEFV exon 2 E148Q hetero多型のKnock In(KI)の作製に成功、さらに同マウスの継代を重ねることでE148Q KIマウス(MEFV E148Q KI MRL/lpr mice)の作製に成功した。また、コントロールとしてpoint mutationを伴わない同部位のMEFV exon 2をKIさせたMRL/lprマウスも作製し、体重変動や生存率、蛋白尿や自己抗体価の推移といった臨床評価、腎臓や皮膚などの組織学的評価、フローサイトメトリーによるB細胞やT細胞、単球等の細胞発現の評価、培養実験によるインフラマソーム活性化の評価を実行した。腎炎の組織学的な重症度判定では、5匹ずつの比較で明らかな有意差はないものの、MEFV E148Q KI MRL/lpr miceで腎炎が軽減する傾向が見られたため、今後数を増やし、さらに検討を行う予定である。また、自己抗体価やメモリーBcellの割合も有意にMEFV E148Q KI MRL/lpr miceで低下しており、この点は腎炎の軽減との一貫性が見られる。また、マウスモデルと一致して、SLE患者検体を用いたMEFVの解析に関しては、MEFV多型が存在することで、SLEにおける腎炎の発症が抑制される結果であり、モデルマウスの結果と矛盾なく、MEFV多型はループス腎炎発症には保護的に働くことが示唆された。これらの結果は今後更なる解析を行った後に報告予定である。ただし、MEFV多型の存在による臨床像の違いにおけるその機序の解明のため更なる研究が必要である。

CRISPER-Cas9 was successfully manufactured with the Knock In(KI) polytype of MEFV exon 2 E148Q hereto, and successfully manufactured with the MEFV exon 2 E148Q KI polytype (MEFV E148Q KI MRL/lpr mice). MEFV exon 2, KI, MRL/lpr and its control in the same site, body weight variation and survival rate, proteinuria and antibody progression, clinical evaluation, histological evaluation of kidney and skin, evaluation of cell development of B cells, T cells, lymphocytes, etc., and evaluation of cell activation in culture were performed. Histological severity of nephritis was determined by comparison of 5 samples, MEFV E148Q KI MRL/lpr mice, and the tendency of nephritis to decrease was determined by comparison of 5 samples. MEFV E148Q KI MRL/lpr mice were found to be lower in the serum than in the control group, and the consistency of the decrease in MEFV E148Q KI MRL/lpr mice was also observed. MEFV analysis in SLE patients is related to the presence of MEFV polytypes and the inhibition of nephritis development in SLE patients. The results will be analyzed in the future. It is necessary to study the mechanism of MEFV polymorphism in clinical imaging.