Orientia感染症の世界分布解明へ向けた多価リケッチア血清検査法の開発

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リケッチアの血清型の責任蛋白質はTSA (type specific antigen)である。血清型KR, KP, TW, KT, SM, KWそれぞれのTSA遺伝子DNAを人工合成し、C末端にHAタグが結合したTSA蛋白質の哺乳類における発現プラスミドを作製した。ヒト293T細胞に導入し、抗HA抗体を用いたウエスタンブロット方により蛋白質発現を確認した。興味あることにKR株のTSA蛋白質のみ発現が確認され、他の株のTSA蛋白質発現は検出されなかった。塩基配列を決定したが、配列的に問題はなかった。これらの結果は、TSA蛋白質がヒト細胞に対して細胞毒性もしくは増殖抑制の活性があることを示している。各血清型の病原性の違いを反映しているのかもしれない。293T細胞において発現させたKR株TSA蛋白質を用い、ベトナムにおいてコミュニティーから得られた血清のTSAに対するIgG抗体有無をウエスタンブロッティング法にて測定した。10サンプル中1つのサンプルにおいて、KR株TSAに結合するIgGが検出された。他の血清型のTSA蛋白質が得られなかったので、合成ペプチドを用いて、血清型特異的IgM抗体の有無を検出する実験系を構築した。現在、各血清型と臨床症状の間の関係の統計学的解析をおこなっている。