融合因子SOFの機能解析を通した精子－卵子の細胞膜融合機構の解明

通过融合因子SOF的功能分析阐明精卵细胞膜融合机制

• 批准号: 20H03172
• 负责人: 野田 大地
• 金额: $ 11.32万
• 依托单位: Kumamoto University (2021-2023)Osaka University (2020)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03172/
• 关键词: 実験動物学; 生殖生物学; 発生工学; 受精; 精子

昨年度、申請者はSOF2や3と相互作用する因子候補を免疫沈降（IP）/質量分析（MS）により明らかにした。そこで今年度は、これらの因子の中でまだ個体レベルでの機能解析が行われていない2つの因子に注目して、CRSPR/Cas9を用いてノックアウト（knockout; KO）マウスを作製した。なお、作製したKOマウスでは標的遺伝子の翻訳領域が全欠損していた。得られたKO雄マウスの精巣や精巣上体の組織学的異常は認められず、精巣上体尾部に蓄えられている精子の形態や運動性も正常だった。また、これらのKO雄マウスを野生型（WT）雌マウスと同居させて交配当たりの産仔数を調べたが、コントロール雄マウスと同居した雌マウスと差はなかった。以上から、解析した2因子は雄の妊孕性には必須でないことが明らかになった。また、SOF2や3と相互作用する因子を同定するための別アプローチとして、これらの因子とビオチン化酵素を結合させた融合タンパク質を発現するトランスジェニックマウスを作製している。融合に必須な精子タンパク質SOF1と相互作用する因子を見つけるために、マウスSOF1を特異的に認識する抗体を作製して、この抗体を使って精子において免疫沈降物を得ることに成功した。現在、このサンプルを用いて相互作用する候補因子の同定をMS解析により試みている。さらに昨年度に引き続き、マウス既知融合関連遺伝子の機能が種を超えて保存されているかを調べる目的で、他動物種の融合関連遺伝子を発現するトランスジェニックマウスの作製を行っている。

Last year, applicants や SOF2や3と interaction する factor candidate を immune degradation (IP)/mass analysis (MS) によ Ming ら に に た. そ こ で our は, こ れ ら の factor in の で ま だ individual レ ベ ル で の line function analytical が わ れ て い な い 2 つ の factor に attention し て, CRSPR/Cas9 を with い て ノ ッ ク ア ウ ト (knockout; KO) マ ウ ス を cropping し た. Youdaoplaceholder0, the production of たKO た ウスで ウスで the 伝 of the subject matter 伝, the 訳 field が is completely damaged て た た た. Have to ら れ た KO male マ ウ ス の fine 巣 や fine 巣 upper の histologic abnormalities は recognize め ら れ ず and fine 巣 upper tail に え storage ら れ て い る の sperm morphology や normal motility も だ っ た. ま た, こ れ ら の KO male マ ウ ス を wild type (WT) female マ ウ ス と cohabitation さ せ て mating when た り の を litter size adjustable べ た が, コ ン ト ロ ー ル male マ ウ ス と cohabitation し た female マ ウ ス と poor は な か っ た. The above ら ら, the analysis of the two factors of た た, <s:1>, male, <s:1>, and pregnenicity に <e:1> must be accompanied by でな, <s:1>, とが, and ら, ら, になった. ま た, SOF2 や 3 と interaction す る factor を with fixed す る た め の don't ア プ ロ ー チ と し て, こ れ ら の factor と ビ オ チ ン phenoloxidase を combining さ せ た fusion タ ン パ ク qualitative を 発 now す る ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を cropping し て い る. Fusion に must な sperm タ ン パ ク qualitative SOF1 と interaction す る factors を see つ け る た め に, マ ウ ス SOF1 を specific に know す る antibody を cropping し て, こ の antibody を っ て sperm に お い て immune sink content を must る こ と に successful し た. Now, こ の サ ン プ ル を with い て interaction す る alternate factor の be を MS analytical に よ り try み て い る. さ ら に yesterday annual に lead き 続 き, マ ウ ス masato even survived 伝 fusion of children both の function が kind を super え て save さ れ て い る か を adjustable べ る purpose で, his species の fusion masato even survived 伝 を 発 now す る ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス の cropping を line っ て い る.

项目成果

Researchmap

研究地图

分子病理学研究所（IMP）(オーストリア)

分子病理学研究所 (IMP)（奥地利）

Baylor College of Medicine(米国)

贝勒医学院（美国）

マウスとゼブラフィッシュにおいて精子膜タンパク質DCST1/2は精子と卵の相互作用に関わる

精子膜蛋白 DCST1/2 参与小鼠和斑马鱼的精卵相互作用

• 发表时间: 2022
• 作者: Sun Jiang;Lu Yonggang;Nozawa Kaori;Xu Zoulan;Morohoshi Akane;Castaneda Julio M;Noda Taichi;Miyata Haruhiko;Abbasi Ferheen;Shawki Hossam H;Takahashi Satoru;Devlin Darius J;Yu Zhifeng;Matzuk Ryan M;Garcia Thomas X;Matzuk Martin M;Ikawa Masahito;野田 大地;野田 大地;野田 大地
• 通讯作者: 野田 大地

熊本大学 生命資源研究・支援センター 生殖機能学分野 ラボHP

熊本大学生命资源研究支援中心生殖机能研究室HP