A novel mechanism of spermatogenesis regulated by long noncoding RNA and multi-functional genome element

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本研究は、精子形成の全容を理解することを目指して、一次精母細胞において長鎖非コードRNAと多機能性ゲノム（dual promoter-enhancer）が協働的に機能するという新しいメカニズムを、マウスを用いて検証するものである。計画3年目までで、精巣特異的長鎖非コードRNAであるlncRNA-HSVIIIノックアウトマウスの中に精子数が減少している個体が観察され、血中テストステロンレベルが減少していることも見出した。本年度は、このlncRNA-HSVIIIノックアウトマウスの精巣を用いたRNA-seq解析を行った。その結果、複数個体のノックアウト精巣で共通して発現低下している遺伝子が226個あることが判明した。その中には、一次精母細胞の遺伝子群やテストステロン合成に関わる遺伝子群も含まれており、それらの一部は定量的RT-PCRでも確認した。一方、DPEによって制御を受ける遺伝子群について、ここ数年でマウス一次精母細胞のChIP-seqデータが公共データベースに蓄積されていることから、それらを再解析して我々のデータと照合することとした。公共の精原細胞と一次精母細胞におけるH3K4me1のChIP-seqデータを解析し、各遺伝子の発現データも参照して、精原細胞で3784個、一次精母細胞で8799個のDPE候補配列を得た。現在、これらのDPE候補配列を、我々が独自に同定していたDPE候補配列と照合して、信頼度の高いDPE配列をリスト化している。さらにCRISPR-a法によるlncRNA-HSVIII過剰発現細胞の樹立を試みたところ、発現レベルが高くないものの、一定程度のlncRNA-HSVIII活性化が見られた。