腎疾患における酸化ストレス評価法の開発と新規治療戦略および基盤概念の提唱

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1) 分泌型FSP1の作用が受容体であるRAGEを介することを明らかにするために、分泌型FSP1の受容体であるRAGE発現をノックアウトしたmProxをCRISPR/Cas9によるゲノム編集で作製した (RAGE-/-mProx)。RAGE-/-mProxでは、分泌型FSP1により発現誘導されるslc7a11, cystathionine, sqstm1, HO-1 mRNAの有意な発現誘導は認められず、これらの因子発現誘導はRAGEを介するものであることが確認された。2)分泌型FSP1は、mProxにおけるリン酸化AKTの発現を誘導し、Nrf2の核内移動を促進したが、RAGE-/-mProxではリン酸化AKTの発現誘導もNrf2の核内移動も観察されなかった。3) 分泌型FSP1はmProxにおける還元型グルタチオン(GSH)の発現を誘導したが、酸化型グルタチオン(GSSG)の発現は誘導しなかった。4) 分泌型FSP1の腎における代謝経路を明確にするために、リコンビナントFSP1投与後のマウス腎内におけるFSP1の局在を蛍光抗体法で明らかにした。投与後120分には、ほぼ全てのFSP1が尿細管上皮細胞のライソゾームに取り込まれ、240分後には分解されていた。5) われわれが開発したPETプローブである64Cu-ATSMが酸化ストレス部位に集積することを動物実験で検討した。ラットに虚血再灌流モデルを作製し、64Cu-ATSMを投与しオートラジオグラフで腎内発現量を検討したが、正常ラットと有意差を認めなかった。 64Cu-ATSMの蓄積量が腎血流量の影響を受けることが示唆されたため、次年度は腎血流量による補正を試みる。