細胞内の創薬ターゲットに対するがん細胞選択的な膜透過抗体医薬の開発

细胞内药物靶标的癌细胞选择性膜渗透性抗体药物的开发

• 批准号: 20H04535
• 负责人: 土居 信英
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H04535/
• 关键词: 蛋白質; 核酸; 癌; バイオテクノロジー; 共焦点顕微鏡

当該課題の計画では、これまで創薬ターゲットとすることが困難であった ('undruggable') がん細胞内の疾患標的に結合するヒトVH単一ドメイン抗体（以下、小型抗体）を、がん細胞選択的に細胞内に送達させることで、２重の鍵をもつきわめて副作用の少ないがん細胞選択的膜透過抗体医薬を開発するために、以下の３つの項目について研究を進めた。(1) mRNAディスプレイ法によるがん細胞表面マーカーにpH依存的に結合する小型抗体の創出。(2)ヒト由来膜透過促進ペプチドのメカニズム解析および活性向上。(3)細胞内疾患標的に結合する小型抗体の創出および選択的膜透過性の付与。前年度までに項目(1)と項目(2)の検討はほぼ完了したため、３年目は項目(3)の検討に注力した。具体的には、前年度までに検討してきた前立腺がんの悪性化に関与するアンドロゲン受容体スプライスバリアント7 (AR-V7) に結合する抗体医薬に加え、リスクヘッジするために核酸医薬についても検討を進め、膜透過促進ペプチドを融合したAgo2をキャリアとしてAR-V7に対するsiRNAを前立腺がん由来LNCaP細胞に効率よく送達し、従来法よりも迅速に標的mRNAをノックダウンすることに成功した (J. Nanobiotechnol. 20, 458, 2022)。また、本手法の汎用性を示すために、'undruggable'な疾患標的として代表的なMYCに結合する小型抗体や、細胞表面マーカーとして肝細胞特異的に発現しているアシアロ糖タンパク質受容体（ASGR）に結合する小型抗体もmRNAディスプレイ法により取得した (学会発表)。さらに、膜透過促進ペプチドとASGR抗体を組み合わせることで、ペプチド医薬の肝細胞選択的なデリバリーに成功した (J. Biol. Chem. 298, 102097, 2022)。

When the project is planned and completed, it is difficult to create ('undruggable') The disease target in the cells is bound to the VH monoclonal antibody (hereinafter, small antibody). Membrane permeable antibody of 2 double key をもつきわめて Side Effects の小ないがん cell selection Medical 薬を开発するために、The following の３つのproject について research progress めた. (1) The method of mRNA synthesis is to create a pH-dependent small antibody that binds to the protein on the cell surface. (2) The activity of the ペプチドのメカニズムanalytical および is increased due to the membrane permeability promotion. (3) The creation of small antibodies that bind to intracellular disease targets and provide membrane permeability through selectable ones. The project (1) and project (2) of the previous year were completed and the project (3) of the third year was completed. Specifically, the previous year's までに検検柗てきたfront standing gland がんの悪悪性色に关 and するアンドロゲンReceiver スプライスバリアント7 (AR-V7)にconjugated antibody medical treatment 薬に加え, リスクヘッジするためにnucleic acid medical treatment についても検问を入め、Membrane permeation promotion ペプチドをfusion したAgo2をキャリアとしてAR -V7 siRNA is derived from LNCaP cells and is delivered efficiently and quickly, and the mRNA is delivered quickly and successfully. (J. Nanobiotechnol. 20, 458, 2022).また、This technique’s general applicability is shown by the すために, the ‘undruggable’ disease target として represents the MYC-binding small antibody や, and the cell surface マーカーとしてHepatocyte-specific に発成しているアシアロsugar sugar receptor (A SGR) is a small antibody that binds to mRNA and is obtained by using the same method. (Learn to write a watch).さらに, membrane permeability promotion ペプチドとASGR antibody を合わせることで, ペプチドmedical 薬の liver cell selection なデリバリーに successful した (J. Biol. Chem. 298, 102097, 2022).

项目成果

Guanine nucleotide exchange factor DOCK11-binding peptide fused with a single chain antibody inhibits hepatitis B virus infection and replication.

• DOI: 10.1016/j.jbc.2022.102097
• 发表时间: 2022-07
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Ide, Mayuko;Tabata, Noriko;Yonemura, Yuko;Shirasaki, Takayoshi;Murai, Kazuhisa;Wang, Ying;Ishida, Atsuya;Okada, Hikari;Honda, Masao;Kaneko, Shuichi;Doi, Nobuhide;Ito, Satoru;Yanagawa, Hiroshi
• 通讯作者: Yanagawa, Hiroshi

PURE mRNAディスプレイ法によるヒトVH単一ドメイン抗体ライブラリーの試験管内選択

PURE mRNA展示法体外筛选人VH单域抗体文库

• 发表时间: 2022
• 作者: 中村順也;有馬英俊;香月正明;入倉 充;加藤里花子，藤原慶，土居信英
• 通讯作者: 加藤里花子，藤原慶，土居信英

Second extracellular loop of human CD9 is a cell-penetrating peptide

人 CD9 的第二个细胞外环是一种细胞穿透肽

• 发表时间: 2021
• 作者: Kumeno;Y.;Sudo;K.;Fujiwara;K.;Doi;N.
• 通讯作者: N.

がん細胞選択的DDSに向けたEGFRに対する環境応答性単一ドメイン抗体の創出

创建针对 EGFR 的环境响应性单域抗体，用于癌细胞选择性 DDS

• 发表时间: 2021
• 作者: Sachiko Shiba;Kazuhiro Ikeda;Kuniko Horie-Inoue;Kotaro Azuma;Tomoka Hasegawa;Norio Amizuka;Tomoaki Tanaka;Toshihiko Takeiwa;Yasuaki Shibata;Takehiko Koji;Satoshi Inoue;明石尚之，清野真梨子，藤原慶，土居信英
• 通讯作者: 明石尚之，清野真梨子，藤原慶，土居信英

ヒト由来膜透過促進ペプチドによって短鎖干渉RNAを簡単に早く細胞質に送達

使用人源膜渗透增强肽轻松快速地将短干扰 RNA 递送至细胞质