細胞内の創薬ターゲットに対するがん細胞選択的な膜透過抗体医薬の開発

细胞内药物靶标的癌细胞选择性膜渗透性抗体药物的开发

• 批准号: 20H04535
• 负责人: 土居 信英
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H04535/
• 关键词: 蛋白質; 核酸; 癌; バイオテクノロジー; 共焦点顕微鏡

当該課題の計画では、これまで創薬ターゲットとすることが困難であった ('undruggable') がん細胞内の疾患標的に結合するヒトVH単一ドメイン抗体（以下、小型抗体）を、がん細胞選択的に細胞内に送達させることで、２重の鍵をもつきわめて副作用の少ないがん細胞選択的膜透過抗体医薬を開発するために、以下の３つの項目について研究を進めた。(1) mRNAディスプレイ法によるがん細胞表面マーカーにpH依存的に結合する小型抗体の創出。(2)ヒト由来膜透過促進ペプチドのメカニズム解析および活性向上。(3)細胞内疾患標的に結合する小型抗体の創出および選択的膜透過性の付与。前年度までに項目(1)と項目(2)の検討はほぼ完了したため、３年目は項目(3)の検討に注力した。具体的には、前年度までに検討してきた前立腺がんの悪性化に関与するアンドロゲン受容体スプライスバリアント7 (AR-V7) に結合する抗体医薬に加え、リスクヘッジするために核酸医薬についても検討を進め、膜透過促進ペプチドを融合したAgo2をキャリアとしてAR-V7に対するsiRNAを前立腺がん由来LNCaP細胞に効率よく送達し、従来法よりも迅速に標的mRNAをノックダウンすることに成功した (J. Nanobiotechnol. 20, 458, 2022)。また、本手法の汎用性を示すために、'undruggable'な疾患標的として代表的なMYCに結合する小型抗体や、細胞表面マーカーとして肝細胞特異的に発現しているアシアロ糖タンパク質受容体（ASGR）に結合する小型抗体もmRNAディスプレイ法により取得した (学会発表)。さらに、膜透過促進ペプチドとASGR抗体を組み合わせることで、ペプチド医薬の肝細胞選択的なデリバリーに成功した (J. Biol. Chem. 298, 102097, 2022)。

When the project is completed, it will be difficult to create a project.('unruggeable') To bind to intracellular disease targets, VH antibodies (hereinafter, mini-antibodies), cell-selected intracellular delivery, 2-fold bonding, and less side effects. To develop cell-selected membrane-permeable antibody drugs, the following 3 projects are being studied. (1)mRNA binding to cell surface by pH-dependent binding (2)From membrane penetration promotion to membrane analysis and activity upward. (3)Creation of small antibodies that bind to intracellular targets and contribute to membrane permeability of selected cells The previous year's review of project (1) and project (2) was completed, and the third year's review of project (3) was focused. The specific results of the previous year's study were as follows: (1) The expression of siRNA in the receptor cell line AR-V7 (AR-V7) was related to the expression of siRNA in the receptor cell line AR-V7 (AR-V7);(2) The expression of siRNA in the receptor cell line AR-V7 (AR-V7) was related to the expression of siRNA in the receptor cell line LNCaP. The method of rapid targeting mRNA was successfully developed by J. Nanobiotechnol. 20, 458, 2022)。The utility of this method is demonstrated by the ability to bind small antibodies to MYC, cell surface proteins, and hepatocyte specific receptor (ASGR) proteins, and by the ability to bind small antibodies to mRNA. In addition, membrane permeation promotion of ASGR antibodies was successfully performed in the selection of hepatocytes from selected drugs (J. Biol. Chem. 298, 102097, 2022).

项目成果

Guanine nucleotide exchange factor DOCK11-binding peptide fused with a single chain antibody inhibits hepatitis B virus infection and replication.

• DOI: 10.1016/j.jbc.2022.102097
• 发表时间: 2022-07
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Ide, Mayuko;Tabata, Noriko;Yonemura, Yuko;Shirasaki, Takayoshi;Murai, Kazuhisa;Wang, Ying;Ishida, Atsuya;Okada, Hikari;Honda, Masao;Kaneko, Shuichi;Doi, Nobuhide;Ito, Satoru;Yanagawa, Hiroshi
• 通讯作者: Yanagawa, Hiroshi

PURE mRNAディスプレイ法によるヒトVH単一ドメイン抗体ライブラリーの試験管内選択

PURE mRNA展示法体外筛选人VH单域抗体文库

• 发表时间: 2022
• 作者: 中村順也;有馬英俊;香月正明;入倉 充;加藤里花子，藤原慶，土居信英
• 通讯作者: 加藤里花子，藤原慶，土居信英

Second extracellular loop of human CD9 is a cell-penetrating peptide

人 CD9 的第二个细胞外环是一种细胞穿透肽

• 发表时间: 2021
• 作者: Kumeno;Y.;Sudo;K.;Fujiwara;K.;Doi;N.
• 通讯作者: N.

がん細胞選択的DDSに向けたEGFRに対する環境応答性単一ドメイン抗体の創出

创建针对 EGFR 的环境响应性单域抗体，用于癌细胞选择性 DDS

• 发表时间: 2021
• 作者: Sachiko Shiba;Kazuhiro Ikeda;Kuniko Horie-Inoue;Kotaro Azuma;Tomoka Hasegawa;Norio Amizuka;Tomoaki Tanaka;Toshihiko Takeiwa;Yasuaki Shibata;Takehiko Koji;Satoshi Inoue;明石尚之，清野真梨子，藤原慶，土居信英
• 通讯作者: 明石尚之，清野真梨子，藤原慶，土居信英

ヒト由来膜透過促進ペプチドによって短鎖干渉RNAを簡単に早く細胞質に送達

使用人源膜渗透增强肽轻松快速地将短干扰 RNA 递送至细胞质