Development of an adaptive evolution method for the creation of enzymes operable over a wide temperature range

开发适应性进化方法来创建可在宽温度范围内操作的酶

基本信息

  • 批准号:
    20J00010
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 3.08万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2020
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2020-04-24 至 2023-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

本研究課題の目的は、従来トレード・オフの関係にある耐熱性と中低温での高い活性を両立する「広」温性酵素の新規創出法を開発することである。幅広い温度範囲において生育可能な広温菌を用いた酵素の指向性進化法により、宿主を変えることなく酵素の低温高活性化や耐熱化を可能にすることを目指した。当該年度は、Kosmotoga属やGeobacillus属をはじめとする広温菌の候補株を対象として、自律複製型及びゲノム組み込み型のプラスミドを用いた形質転換を試みた。安定した形質転換手法の確立には至っていないが、薬剤耐性を付与された複数の形質転換体を取得しており、現在解析を進めている。また、当初予定していた広温性酵素のモデル遺伝子の導入による大腸菌や広温菌細胞への毒性が確認されたため、代替としてスクリーニングの容易なタンパク質分解酵素等を使用して検証を進めている。さらに、並行して各種広温菌由来の酵素の活性測定を行った結果、一部で活性を確認している。広温性酵素の取得に向けて今後も引き続き検証を進める。
The purpose of this study is to develop a new method for the creation of thermophilic enzymes in the context of heat tolerance, high activity at medium and low temperatures. Temperature Range of Fertility: Temperature Range of Fertility: Enzyme Directional Evolution: Host Range of Fertility: Low Temperature and High Activity of Enzymes: Heat Tolerance When Kosmotoga genus and Geobacillus genus are selected, the candidate strains of the genus are selected, and the candidate strains of the genus are selected. The method of stability and quality transformation is established, and the tolerance is applied to the acquisition and analysis of multiple quality transformation bodies. In addition, the introduction of the enzyme vector into E. coli and E. coli cells has been confirmed to be toxic, and the use of the enzyme vector has been improved. In addition, the activity of various enzymes derived from warm bacteria was measured in parallel, and some of the activities were confirmed. The acquisition of thermophilic enzymes will lead to the development of new technologies.

项目成果

期刊论文数量(7)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Heterologous gene expression and characterization of two serine hydroxymethyltransferases from Thermoplasma acidophilum
  • DOI:
    10.1007/s00792-021-01238-9
  • 发表时间:
    2021-07-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    2.9
  • 作者:
    Fauziah Ma'ruf, Ilma;Sasaki, Yuka;Honda, Kohsuke
  • 通讯作者:
    Honda, Kohsuke
l‐Lactate oxidase‐mediated removal of l‐lactic acid derived from fermentation medium for the production of optically pure D‐lactic acid
  • DOI:
    10.1002/biot.202100331
  • 发表时间:
    2022-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    4.7
  • 作者:
    K. Okano;Yu Sato;Shnji Hama;Tsutomu Tanaka;H. Noda;A. Kondo;K. Honda
  • 通讯作者:
    K. Okano;Yu Sato;Shnji Hama;Tsutomu Tanaka;H. Noda;A. Kondo;K. Honda
好熱好酸性アーキアThermoplasma acidophilum由来の2種類のセリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼの異種発現及び機能解析
嗜热嗜酸古菌嗜酸热原体两种丝氨酸羟甲基转移酶的异源表达和功能分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    佐藤 悠;Maruf Ilma Fauziah;佐々木 由佳;Krebs Anastasia;Nieber Jochen;谷口 博範; 岡野 憲司;木谷 茂; Restiawaty Elvi;Akhmaloka;本田 孝祐
  • 通讯作者:
    本田 孝祐
Production of optically pure D-lactic acid from renewable resources
利用可再生资源生产光学纯 D-乳酸
  • DOI:
  • 发表时间:
    2017
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    岡野憲司;濵真司;野田秀夫;近藤昭彦;本田孝祐;Kenji Okano
  • 通讯作者:
    Kenji Okano
Genome editing by miniature CRISPR/Cas12f1 enzyme in Escherichia coli
  • DOI:
    10.1016/j.jbiosc.2021.04.009
  • 发表时间:
    2021-07-22
  • 期刊:
  • 影响因子:
    2.8
  • 作者:
    Okano, Kenji;Sato, Yu;Honda, Kohsuke
  • 通讯作者:
    Honda, Kohsuke
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    2021
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