高次生命現象に関わるタンパク質を解析できる単一細胞特異的プロテオーム解析法の開発

开发单细胞特异性蛋白质组分析方法，可分析参与高阶生命现象的蛋白质

• 批准号: 20J00905
• 负责人: 油屋 駿介
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-24 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J00905/
• 关键词: プロテオミクス解析; C. elegans; Caenorhabditis elegans; プロテオミクス; Cell-selective BONCAT

本研究では線虫の単一神経細胞をアジド基で特異的に標識し、標識した細胞を50～100匹の線虫から回収することで、少数の線虫から目的神経細胞特異的なプロテオミクス解析を行うことを目的とする。本年度は(1) 単一神経細胞に変異型フェニルアラニルtRNA転移酵素 (変異RS)を発現させるためのベクターの最適化 (2) 遺伝子回路を用いた単一神経細胞における変異RSの発現 の2点を主に行った。(1) 単一神経細胞に変異RSを発現させるためのベクターの最適化従来のベクターでは一部の細胞特異的なプロモーターにおいて変異RSを発現させることができなかった。そこで本年度はベクターのコザック配列を検討することで、従来と比べて発現量が多いベクターを構築した。コザック配列を検討することで、従来のコザック配列では発現することができないプロモーターにおいて、変異RSを発現することが可能となった。(2) 遺伝子回路を用いた単一神経細胞における変異RSの発現従来のベクターを用いると、2つのプロモーターを組み合わせなければ単一の神経細胞に変異RSを発現することができない場合に対応できない。そこでsplit cGALシステム (et al PNAS) を用いて、二つのプロモーターが共通で機能する細胞のみに変異RSを発現できるシステムを構築した。さらに、1つのプロモーターだけが機能して、もう一方のプロモーターが機能しない場合に発現するシステムをcGALシステムとCRE-Loxシステムを組み合わせで検討した。

This study で は nematodes の 単 a god 経 cells を ア ジ ド base で specific に marks し, し た cells を 50 ~ 100 の nematodes か ら back 収 す る こ と で, minority の nematodes か ら 経 cell specific purpose god な プ ロ テ オ ミ ク ス parsing line を う こ と を purpose と す る. 単 は this year (1) a god 経 cells に - alien フ ェ ニ ル ア ラ ニ ル tRNA planning shift enzyme (- different RS) を 発 now さ せ る た め の ベ ク タ ー の optimization (2) heritage 伝 を sub circuit using い た 単 a god 経 cells に お け る - different RS の 発 の now 2 PM を main line に っ た. (1) a god 単 に 経 cells - different RS を 発 now さ せ る た め の ベ ク タ ー の optimization 従 to の ベ ク タ ー で は a の cell specific な プ ロ モ ー タ ー に お い て - different RS を 発 now さ せ る こ と が で き な か っ た. そ こ で this year は ベ ク タ ー の コ ザ ッ ク match column を beg す 検 る こ と で, 従 と than べ て 発 the current quantity が い ベ ク タ ー を build し た. Beg す コ ザ ッ ク match column を 検 る こ と で, 従 の コ ザ ッ ク match column で は 発 now す る こ と が で き な い プ ロ モ ー タ ー に お い て, - different RS を 発 now す る こ と が may と な っ た. (2) heritage 伝 を sub circuit with い た 単 a god 経 cells に お け る - different RS の 発 従 now to の ベ ク タ ー を with い る と, 2 つ の プ ロ モ ー タ ー を group み close わ せ な け れ ば 単 に a の god 経 cells - different RS を 発 now す る こ と が で き な い occasions に 応 seaborne で き な い. そ こ で split cGAL シ ス テ ム et al (PNAS) を with い て, two つ の プ ロ モ ー タ ー が function of common で す る cells の み に - different RS を 発 now で き る シ ス テ ム を build し た. さ ら に, 1 つ の プ ロ モ ー タ ー だ け が function し て, も う side の プ ロ モ ー タ ー が function し な い occasions に 発 now す る シ ス テ ム を cGAL シ ス テ ム と CRE - Lox シ ス テ ム を group み close わ せ で beg し 検 た.

项目成果

Produced β-hydroxybutyrate after β-hydroxy-β-methylbutyrate (HMB) administration may contribute HMB function in mice.

• DOI: 10.1016/j.bbrep.2021.101097
• 发表时间: 2021-09
• 期刊: Biochemistry and biophysics reports
• 影响因子: 2.7
• 作者: Ikeda K;Takahashi M;Aburaya S;Harada D;Ikeda M;Kitagawa Y;Soma Y;Izumi Y;Bamba T;Furuse M
• 通讯作者: Furuse M

線虫Caenorhabditis elegansの神経細胞種特異的なプロテオミクス解析

线虫秀丽隐杆线虫的神经元细胞类型特异性蛋白质组学分析

• 发表时间: 2021
• 作者: 油屋 駿介;山内 悠至;馬場 健史;植田 充美;青木 航
• 通讯作者: 青木 航

Neuronal subclass-selective proteomic analysis in Caenorhabditis elegans

• DOI: 10.1038/s41598-020-70692-w
• 发表时间: 2020-08-13
• 期刊: SCIENTIFIC REPORTS
• 影响因子: 4.6
• 作者: Aburaya, Shunsuke;Yamauchi, Yuji;Ueda, Mitsuyoshi
• 通讯作者: Ueda, Mitsuyoshi

Porphyromonas gingivalis induces entero-hepatic metabolic derangements with alteration of gut microbiota in a type 2 diabetes mouse model.

• DOI: 10.1038/s41598-021-97868-2
• 发表时间: 2021-09-15
• 期刊: Scientific reports
• 影响因子: 4.6
• 作者: Kashiwagi Y;Aburaya S;Sugiyama N;Narukawa Y;Sakamoto Y;Takahashi M;Uemura H;Yamashita R;Tominaga S;Hayashi S;Nozaki T;Yamada S;Izumi Y;Kashiwagi A;Bamba T;Ishihama Y;Murakami S
• 通讯作者: Murakami S